[发明专利]一种I型和V型胶原蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种I型和V型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，按照以下步骤进行： 

（1） 原料的预处理：

将去除鱼鳞及皮下组织的鱼皮，用自来水清洗，沥干，剪碎，烘干，粉碎，浸泡于NaOH溶液，搅拌，离心取沉淀，用自来水冲洗后烘干；

（2） 胶原蛋白的提取：

将预处理过的鱼皮置于预冷水中，加入乙酸和胃蛋白酶，搅拌后离心取上清液，缓慢加入NaCl粉末至混合液中，盐析过夜，再次离心，所得白色沉淀即为胶原蛋白粗品；

（3）胶原蛋白的纯化：

将上述胶原蛋白粗品充分溶解于含有NaCl的Tris-HCl缓冲液中，离心取上清液，加入NaCl至上清液中，盐析，再次离心，分别收集沉淀和上清液：

A. 将沉淀溶解于乙酸1中，用乙酸2透析后，冷冻干燥，即得I型胶原蛋白；

B. 向上清液中再次加入NaCl至混合液中，盐析，离心取沉淀，同步骤A中I型胶原蛋白操作，溶解，透析，干燥后即得V型胶原蛋白。

2. 根据权利要求1所述的一种I型和V型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述烘干条件均为50-60°C；所述粉碎至20-100目；所述粉碎后的鱼皮与NaOH溶液比例为1g:50-100mL，其中NaOH溶液浓度为0.1mol/L；所述搅拌时间为24-36 h；所述用自来水洗至pH为6-8；所述离心为2,500g离心10min。

3. 根据权利要求1所述的一种I型和V型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述乙酸在水中的浓度为0.1-0.5 mol/L，所述胃蛋白酶在水中的质量分数为0.1%；所述搅拌时间为36-48h；所述加入NaCl粉末的混合液中NaCl的浓度为2.0 mol/L；所述搅拌后离心为100,000g离心60min，所述再次离心为100,000g离心 15 min。

4. 根据权利要求1所述的一种I型和V型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述Tris-HCl缓冲液浓度为0.05 mol/L并含有1.0 mol/L NaCl，pH 7.5；所述加入NaCl后的上清液中NaCl的浓度为2.4mol/L；所述离心为100,000g离心60min，所述再次离心为100,000g离心15 min；

其中步骤（3）第A步中所述乙酸1浓度为0.1-0.5mol/L；所述乙酸2浓度为0.01-0.05 mol/L，所述透析时间为48-72h；

其中步骤（3）第B步中所述加入NaCl后的混合液中NaCl浓度为4.0mol/L；所述离心为100,000 g离心15min。

5. 根据权利要求1所述的一种I型和V型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，上述技术方案中，所有提取和纯化操作均在4°C下进行。

6. 根据权利要求1所述的一种I型和V型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，上述技术方案中所述的鱼皮包括所有用于加工生鱼片、鱼糜制品的淡水鱼和海水鱼的鱼皮。