[发明专利]一种从猪毛中提取和检测皮质醇的方法

说明书

技术领域

本发明属于分析检测领域，具体涉及一种从猪毛中提取和检测皮质醇的方法。 

背景技术

我国是一个养猪大国，但是养殖业长期以来对“快速”和“高产”的盲目追求带来一系列严重的环境和社会问题，如养殖环境恶化、环境污染严重、畜禽流行病频发，这不仅造成巨大的经济损失，而且危及人类的健康。在不规范的养殖或高强度的集约化养殖模式下，猪经常受到各种应激（断奶、混群、阉割、运输等），长期的应激最终使得猪免疫力和抵抗力下降。经常依赖添加过量的抗生素和各种疫苗来维持动物健康或者生命，不但严重影响猪自身健康，而且使得猪肉食品的质量和安全得不到保障，从而威胁人类健康，使我国的畜牧业可持续发展受到严重的影响。 

动物应激反应的最主要特征是下丘脑-垂体-肾上腺轴（Hypothalamic-pituitary-adrenal axis,HPA axis）活性增加。HPA轴兴奋的终端产物是糖皮质激素。应激时，迅速升高的糖皮质激素有助于机体动员能量，应对应激环境，对动物的生存有重要意义。但一旦应激源长时间存在，HPA轴持续兴奋，血液中的糖皮质激素水平一直保持在高水平，就会对机体产生负面作用，使生长受阻，免疫力下降。 

目前判断猪应激的方法主要是通过检测其血液中的皮质醇。该方法在采集血液过程中需要将猪进行保定，采集过程较为困难，同时保定又给猪带来了新的应激，使测定结果难以给出准确的判断。因此，目前畜牧业生产上迫切需要一种简单、易行，对猪应激较小的，且能够反映猪皮质醇水平的方法。近年来的人类医学研究表明，毛发中含有皮质醇，并且可以反映应激状况。但是在猪上，由于其毛发特性与人类的差异，毛发粗硬，附有油脂以及其他杂物，使得其处理过程等比较复杂，并且由于种间的差异猪毛中皮质醇含量与人类也不相同，目前关于猪毛发中皮质醇含量的测定尚未见报道。 

发明内容

本发明的目的是针对上述技术问题提供一种从猪毛中提取和测定皮质醇的方法，该方法是一种非侵害性，无应激的检测手段，简单易行，成本低，对于监测猪健康福利状况具有十 分积极的作用。 

本发明的目的可以通过以下技术方案实现： 

一种从猪毛中提取和检测皮质醇的方法，该方法包括以下步骤： 

1）取猪毛，用有机溶剂洗涤后晾干； 

2）将晾干后的猪毛和有机溶剂混合，得到混合物； 

3）将所述的混合物360°旋转后，放入离心机中离心，收集上层清夜； 

4）将所述的上层清液用氮气流浓缩吹干，吹干后用PBS溶液溶解，溶解后采用放射免疫测定法测定皮质醇含量。 

步骤1）中所述猪毛的长度为0.8～1.2mm。步骤1）中所述洗涤的次数为3次。 

步骤1）中所述有机溶剂为无水甲醇，步骤2）中所述的有机溶剂为无水甲醇。 

步骤2）中猪毛与有机溶剂的质量比为1：3.5～4.5。 

步骤3）中所述的360°旋转是在转动器中进行，旋转的速度为28～32rpm，旋转的时间为22～24h。 

步骤3）中所述离心是以转速为4500rpm的速度转动12～18分钟，所述步骤3）中的离心是在温度为20℃的条件下进行。 

所述步骤4）中PBS溶液的PH=7.4，浓度为0.1mol/L。 

本发明的有益效果 

随着动物福利问题受到越来越广泛的关注，采集猪的毛发，并进行皮质醇的提取和检测，是一种对猪非侵害性，无应激的检测手段，简单易行，成本低，对于监测猪健康福利状况具有十分积极的作用。皮质醇是反映机体应激状态的一个重要指标，目前反映猪的皮质醇水平都是通过检测其血液中皮质醇含量，以往的研究表明中国地方猪种太湖猪血液皮质醇含量显著高于外来猪品种（78.29±6.89vs47.88±4.73，P<0.05），利用本方法我们检测了猪毛发中皮质醇，其结果与血液结论一致，表明用该方法检测可以基本反映动物机体的皮质醇水平。另一方面采集猪血液需要将猪进行固定，采集过程中猪会尽力反抗，给猪造成较大的应激，也使得检测值易出现较大的波动，而采集猪毛发对其没有应激，样本采集方便，这无疑给猪健康福利状况的监测提供了极大的帮助。 

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围不限于此：