[发明专利]芒果畸形病病原菌（Fusarium mangiferae）分子快速检测的方法与应用有效
| 申请号： | 201410065341.7 | 申请日： | 2014-02-26 |
| 公开（公告）号： | CN103952469A | 公开（公告）日： | 2014-07-30 |
| 发明（设计）人： | 吴婧波;柳凤;詹儒林;李国平;赵艳龙;常金梅;何衍彪 | 申请（专利权）人： | 中国热带农业科学院南亚热带作物研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 广州市南锋专利事务所有限公司 44228 | 代理人： | 刘广生 |
| 地址： | 524000 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 芒果 畸形 病原菌 fusarium mangiferae 分子 快速 检测 方法 应用 | ||
1.一种芒果畸形病病原菌（Fusarium mangiferae）分子快速检测的方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）设计一组SCAR特异性引物，其中：
上游引物W342：5，-ACAACTCCGCACCCTCAATG-3，；
下游引物W1772：5，-GGACCCTCAGACTGCCCAAT-3，；
（2）对样本进行处理，得到样本中的DNA；然后以样本的DNA为模板，进行PCR反应，电泳检测PCR产物，当PCR产物检测呈现1376 bp条带时，即表明样本中含有芒果畸形病的病原菌（Fusarium mangiferae）。
2.根据权利要求1所述芒果畸形病病原菌（Fusarium mangiferae）分子快速检测的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的样本处理的样本为芒果植株组织时，处理的方式为利用改良的CTAB法提取芒果植株组织中的基因组DNA。
3.根据权利要求1所述芒果畸形病病原菌（Fusarium mangiferae）分子快速检测的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的样本处理的样本为分离的病原菌时，处理的方式为改良的SDS法提取菌丝基因组DNA。
4.根据权利要求1所述芒果畸形病病原菌（Fusarium mangiferae）分子快速检测的方法，其特征在于：步骤（2）中所述PCR反应体系共25μL，包括：10×PCR buffer TaKaRa 2.5μL，10mmol/L dNTPs 2μL，10ng/μL模板0.5μL，20μmol/L混合引物1μL，5U/μL Taq酶TaKaRa 0.13μL，加ddH2O补足至25μL。
5.根据权利要求1所述芒果畸形病病原菌（Fusarium mangiferae）分子快速检测的方法，其特征在于：步骤（2）中所述PCR反应条件为94℃ 5min；94℃ lmin，50℃ 30s，72℃ lmin，45个循环；72℃ 5min。
6.根据权利要求1所述芒果畸形病病原菌（Fusarium mangiferae）分子快速检测的方法，其特征在于：步骤（2）中所述PCR产物于1.0% Agarose凝胶上电泳后，UV检测，凝胶成像系统拍照记录。
7.根据权利要求1或6所述芒果畸形病病原菌（Fusarium mangiferae）分子快速检测的方法，其特征在于：步骤（2）中所述电泳检测的条件为100V，35min。
8.权利要求1~7任一项所述芒果畸形病病原菌（Fusarium mangiferae）分子快速检测的方法应用于田间芒果畸形病的早期诊断以及病菌的监测和鉴定。
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