[发明专利]邻苯二甲酸二丁酯化学发光酶联免疫检测试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明属于化学发光酶联免疫检测技术领域。更具体地，涉及一种邻苯二甲酸二丁酯化学发光酶联免疫检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

邻苯二甲酸二丁酯（Dibutyl phthalate，DBP）是聚氯乙烯最常用的增塑剂，可使制品具有良好的柔软性、稳定性、耐挠曲性、黏结性和防水性均优于其他增塑剂，因此广泛存在于食品包装、化妆品、医疗器材以及环境水体中。

邻苯二甲酸二丁酯长期以来被认为是无害物质，但近年来研究发现，邻苯二甲酸二丁酯作为重要的环境化学污染物对生殖系统、内分泌系统、神经系统等存在毒性效应，对神经系统的主要毒性效应机制可能是：直接损伤神经细胞，致使细胞膜损伤；降低脂质过氧化物酶得活性，产生氧化应激反应；干扰神经细胞的代谢和诱导其细胞凋亡。由于神经的损失是不可逆的，这样的威胁引起了人们的高度关注；而且大量的生产加工使其在环境中分布广泛，不易清除，且邻苯二甲酸二丁酯能通过多种暴露途径，如食物、室内空气、饮用水、化妆品等进入人体，形成富集。因此对邻苯二甲酸二丁酯的检测及治理研究也尤其迫切和重要。

1977年美国国家环保局（EPA）将DEHP、DOP、BBP、DBP、DEP、DMP 6种PAEs化合物列为优先控制的有毒污染物。2013年9月中国出口韩国食品中邻苯二甲酸二丁酯含量超标，2012年11月某知名高端酒的检测报告显示，酒中共检测出3种塑化剂成分。其中，邻苯二甲酸二丁酯（DBP）的含量为1.08mg/kg.超标达260%。各种塑化剂风波加重了民众对塑化剂的恐惧，建立一种快速、有效的检测方法显得尤为重要。

邻苯二甲酸二丁酯的检测最常使用的方法为仪器分析法，颜流水（分析实验室，2007）等人用固相萃取-液质联用法对饮用水中邻苯二甲酸二丁酯进行检测，检出限可以达到0.1ng/L，王少杰（山东农业科学，2012）等人采用高效液相色谱法检测蔬菜中邻苯二甲酸二丁酯的含量，方法的检出限达到0.025μg/mL，努那帕（东华大学，2011）建立荧光定量PCR的方法对邻苯二甲酸二丁酯浓度进行检测，该方法的检测下限可达8.439pg/L。行标SN/T3147-2012中采用气质联用（GC-MS）方法对出口食品中的邻苯二甲酸酯类进行检测，该方法对邻苯二甲酸二丁酯的定量限为0.1mg/kg。上述几种方法中均需要使用价格昂贵的仪器，虽然上述几种仪器分析法的检测精确度高，但因其仪器化程度高、检测时间长、过程繁琐、检测费用昂贵等，从而阻碍了其推广应用，因而通常作为实验室确证方法，但是无法满足现场或者大批量的快速筛查检测。而免疫分析法因成本低、操作简单、速度快、一次检测样本量大、仪器化程度低，值得我们推广成为常用的筛选方法。目前关于邻苯二甲酸二丁酯的免疫分析方法也有报道，申请号为CN201210010889.2的专利对邻苯二甲酸二丁酯的检测采用胶体金免疫试纸的方法进行了描述，申请号为CN201220694025.2的专利公开了一种检测邻苯二甲酸二丁酯的化学发光试剂盒，采用酶标抗原和磁标抗体的免疫反应模式，但是均存在灵敏度不够好、检测限不够低的缺陷，仍然满足不了许多邻苯二甲酸二丁酯含量不是特别高的环境及农产品的检测。另外，申请号为CN201220694102.4的专利对检测邻苯二甲酸二丁酯采用间接ELISA试剂盒的方法进行了描述，但存在操作时间长，灵敏度不够高的缺点。 

研制稳定性高、操作简单、设备要求低、廉价的CLIA试剂盒对于准确快速、高通量检测邻苯二甲酸二丁酯类具有非常重要的经济和社会意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有邻苯二甲酸二丁酯类检测技术的缺陷和不足，提供一种准确、灵敏、快速、能够高通量检测邻苯二甲酸二丁酯类的方法。

本发明目的是提供一种邻苯二甲酸二丁酯化学发光酶联免疫检测试剂盒。

本发明另一目的是提供所述试剂盒的应用和使用方法。

本发明上述目的通过以下技术方案予以实现：

本发明提供了一种邻苯二甲酸二丁酯化学发光酶联免疫检测试剂盒，包含以下成分：

（1）包被有邻苯二甲酸二丁酯抗原的化学发光酶标板；

（2）邻苯二甲酸二丁酯酶标抗体；

（3）邻苯二甲酸二丁酯标准品溶液；

（4）化学发光液；

（5）浓缩洗涤液；

其中，所述的邻苯二甲酸二丁酯抗原是4-氨基邻苯二甲酸二丁酯与卵清蛋白（OVA）共价偶联合成得到的偶联物；而4-氨基邻苯二甲酸二丁酯是以邻苯二甲酸和正丁醇为原料通过重氮化法合成得到的，4-氨基邻苯二甲酸二丁酯的结构式如式（Ⅰ）所示：