[发明专利]烟草或其制品中可溶性蛋白质含量的测定方法

权利要求书

1.烟草或其制品中可溶性蛋白质含量的测定方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）称取烟草或其制品样品，加入蒸馏水溶解，然后超声震荡、离心得到待测样品溶液；

（2）将 98%的牛血清蛋白溶于蒸馏水中，配制牛血清白蛋白储备液，然后将储备液稀释成不同浓度的牛血清白蛋白标准溶液；

（3）将无水乙醇加入到容量瓶中，用蒸馏水定容，配成90%的乙醇溶液；

（4）将考马斯亮蓝G-250溶于上述 90%的乙醇中，加入质量浓度为850 g/L的磷酸，最后用蒸馏水定容，再加入Brij-35，配成考马斯亮蓝G-250标准溶液；

（5）将牛血清白蛋白标准溶液分别与考马斯亮蓝G-250标准溶液和待测样品溶液结合，通过连续流动分析仪的程序运行将各试剂按序进样，在595 nm波长下检测待测样品中可溶性蛋白质的含量。

2.如权利要求1所述的烟草或其制品中可溶性蛋白质含量的测定方法，其特征在于包括以下具体步骤： 

（1）称取烟草或其制品样品0.25～1.0 g，加入蒸馏水25～100 mL溶解，然后超声震荡20～45 min、以3000-10000转/分钟的转速离心5～20 min，将上清液通过中速定量无灰滤纸过滤至样品杯中，得到待测样品溶液；

（2）称取1.0 g牛血清蛋白溶于蒸馏水中，定容至100 mL，中速定量无灰滤纸过滤，得到10 mg/mL的牛血清白蛋白储备液，然后将储备液稀释成浓度为1.0 mg/mL、0.8 mg/mL、0.6 mg/mL、0.4 mg/mL和0.2 mg/mL的牛血清白蛋白标准溶液各100 mL；

（3）量取900 mL无水乙醇加入到1000 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至1000 mL，中速定量无灰滤纸过滤，得到90%的乙醇溶液；

（4）称取100 mg考马斯亮蓝G-250溶于50 mL上述 90%的乙醇中，加入质量浓度850 g/L的磷酸100 mL，最后用蒸馏水定容至1000 mL，加入0.5 mL Brij-35，中速定量无灰滤纸过滤，得到考马斯亮蓝G-250标准溶液；

（5）将牛血清蛋白标准溶液和待测样品溶液分别与考马斯亮蓝G-250标准溶液结合，通过连续流动分析仪的程序运行将各试剂按序进样，在595 nm波长下检测待测样品中可溶性蛋白质的含量。

3.如权利要求2所述的烟草或其制品中可溶性蛋白质含量的测定方法，其特征在于：步骤（5）中连续流动分析仪的进样速率为30～40个样品/小时，进样清洗比例为1:1。

4.如权利要求1或2所述的烟草或其制品中可溶性蛋白质含量的测定方法，其特征在于：还包括步骤（6），所述步骤（6）为按YC/T31-1996标准方法测定待测样品中的水分含量，进而计算待测样品中可溶性蛋白质的绝干含量。