[发明专利]一种从新鲜茶叶中提取单体EGCG的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物化学技术领域，具体涉及一种从新鲜茶叶中提取单体EGCG的方法。

背景技术

EGCG，即表没食子儿茶素没食子酸酯，是从绿茶中提取的一种成分，它是绿茶主要的活性和水溶性成分，占绿茶毛重的9-13%，EGCG是绿茶茶多酚的主要组成成分，也是绿茶儿茶素类的主成分，它占绿茶儿茶素类总量的10-15%，儿茶素类包括：没食子酸儿茶素（Gallocatechin，GC）、表没食子酸儿茶素（Epigallocatechin，ECG）、表没食子酸儿茶素没食子酸酯（EGCG）、表没食子酸儿茶素（EGC）和表儿茶素（EC）等，其中抗氧化活性依次为EC＜ECG＜EGC＜EGCG。因为具有特殊的立体化学机构，EGCG是绿茶中最有效的抗氧化多酚，具有非常强的抗氧化、抗癌、抗突变等活性。抗氧化活性至少是维生素C的100多倍，是维生素E的25倍，能够保护细胞和DNA受损害，这种损害相信与癌症、心脏疾病和其它重大疾病有关，EGCG的这些功效归结于它们对氧自由基的清除能力。EGCG在抗癌和心血管疾病方面担当了重要的角色。此外，它也用作肿瘤多药耐药性的逆转剂，能够改善癌细胞对化疗的敏感性并减轻对心脏的毒性。许多研究表明EGCG具有抗自由基DNA损害，抗辐射和紫外线，阻止油脂过氧化，减少血清中低密度胆固醇、超低密度胆固醇和甘油三酯的含量，干扰癌细胞生存所需的信号传递，抑制饮食中的致癌物质，与肠、肝和肺中的其它酶和抗氧化剂作用共同阻止某些致癌物质的活力，清除自由基，抵御污染、日晒和吸烟的影响，防治皮肤老化和起皱。

目前分离儿茶素的方法一般分为两步：首先从茶末中提取含有儿茶素的茶多酚粗制品；其次从粗提取物中纯化分离儿茶素组分。若要得到儿茶素中的各种单体组分，则需进一步经过柱色谱法、半制备高效液相色谱法（HPLC）纯化或者其它仪器方法纯化。由于儿茶素各组分的化学结构与性质十分相近，采用一般的方法很难分离，根据资料分析，目前分离制备儿茶素单体的方法主要有以下几种：

（1）柱层析分离法

该方法是将茶多酚粗品经一定的溶剂溶解后，上柱分离，用洗脱剂洗脱，收集儿茶素。柱层析的关键是柱填料与洗脱剂的选择。国内外报道的柱填料有三大类型：吸附型柱、离子交换柱、凝胶柱。这种分离方法繁琐、费时、产品纯度不高、还有溶剂残留。

（2）高效液相（HPLC）制备色谱法

制备型HPLC主要用于分离纯化出儿茶素的单体组分。工艺流程是粗品经葡聚糖凝胶SephadexLH-20柱分离纯化出儿茶素混合物，一般以不同梯度的丙酮水溶液作洗脱剂，分离得到酯型儿茶素和非酯型儿茶素两组流分，再经HPLC制备柱分离纯化，采用甲醇/水为洗脱剂，进一步纯化得到儿茶素单体组分，所得儿茶素产品纯度较高，但存在成本高，周期长、后期溶剂难以完全除尽等缺点。

（3）高速逆流色谱法（HSCCC）

高速逆流色谱法是80年代发展起来的新技术，其特点是高速运转产生的重力场使固定相能在分离柱中实现高的保留，从而大大提高了分离能力，该法属仪器分离法，溶剂系统中各溶剂在分液漏斗中混合后，上层为固定相，灌入色谱分离柱；下层为流动相，将粗品溶解成5-10%的溶液。当流动相流经色谱柱时，儿茶素各组分得到分离。这种分离方法是在两相之间进行的，克服了使用固体吸附材料造成的样品不可逆吸附或降解的缺点，样品可最大限度的得以回收。但该方法成本高，制备量小，不适宜工厂化大规模生产。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种从新鲜茶叶中提取单体EGCG的方法，该法具有操作简单、分离效率高、成本低、生产周期短，生产的产品纯度高的优点。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种从新鲜茶叶中提取单体EGCG的方法，它包括以下步骤：

S1.浸泡：将新鲜茶叶置于浸提器中，加入纯化水恒温浸泡1.8～2.5h，将浸提器中的混合液过18～24目筛，得滤液；其中，所述恒温浸泡温度为65～100℃；

S2.离心：将滤液置于温度为30～50℃、压强为0.1～0.3MPa的环境下离心50～70s，弃去沉淀，离心液用于下步操作；其中，所述离心机的转速为6500～7000转/min；

S3.一次吸附：将步骤S2所得离心液上样于LX-8树脂，吸附离心液中的EGCG，用70～75%的乙醇洗脱，收集固形物含量为4～6%的洗脱液；

S4.MVR浓缩：将收集到的洗脱液加至MVR浓缩器中浓缩100～140min，浓缩温度为60～75℃，得浓缩液；