[发明专利]具有完整三维结构和脉管网络的小肠脱细胞支架制备方法

权利要求书

1.一种具有完整三维结构和脉管网络的小肠脱细胞支架制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：取健康成年的哺乳动物麻醉后，肌肉注射抗凝药物，打开腹腔选取一段血供丰富的小肠段，分离所述小肠的肠系膜根部的动、静脉血管，进行动、静脉血管插管固定并在近心端结扎离断血管；

步骤二：夹闭所述小肠段的两端部，离断所述小肠段的两端部并分别插管固定，分离肠系膜，完整取下所需肠管及肠系膜血管，置于低温环境中，用生理盐水反复冲洗；

步骤三：依次使用磷酸盐缓冲液、含乙二胺四乙酸的胰蛋白酶溶液、磷酸盐缓冲液、十二烷基硫酸钠溶液、磷酸盐缓冲液、聚乙二醇辛基苯基醚溶液、磷酸盐缓冲液分别灌注动脉、静脉、肠管；

步骤四：所述灌注完成后使用过氧乙酸和乙醇混合液浸泡消毒，得到小肠脱细胞支架。

2.如权利要求1所述的具有完整三维结构和脉管网络的小肠脱细胞支架制备方法，其特征在于：

其中，所述步骤三中所有的所述PBS溶液的灌注时间为动脉、静脉、肠管各30min，所述动脉和所述静脉的灌注速度为3-15ml/min，所述肠管的灌注速度为50-500ml/min。

3.如权利要求1所述的具有完整三维结构和脉管网络的小肠脱细胞支架制备方法，其特征在于：

其中，所述含乙二胺四乙酸的胰蛋白溶液的质量体积比为0.25%，灌注时所需温度为37℃，灌注时间为所述动脉、所述静脉、所述肠管各30min，所述动脉和所述静脉的灌注速度为3-15ml/min，所述肠管的灌注速度为50-500ml/min。

4.如权利要求1所述的具有完整三维结构和脉管网络的小肠脱细胞支架制备方法，其特征在于：

其中，所述十二烷基硫酸钠溶液的质量体积比为0.1%，所述肠管的灌注时间为8小时，所述动脉和所述静脉的灌注时间均为4小时，所述动脉和所述静脉的灌注速度为3-15ml/min，所述肠管的灌注速度为50-500ml/min。

5.如权利要求1所述的具有完整三维结构和脉管网络的小肠脱细胞支架制备方法，其特征在于：

其中，所述聚乙二醇辛基苯基醚溶液的质量体积比为1%，pH值为11.4，所述肠管灌注时间为4小时，灌注速度为50-500ml/min，所述动脉和所述静脉的灌注时间分别为1小时，灌注速度均为3-15ml/min。

6.如权利要求1所述的具有完整三维结构和脉管网络的小肠脱细胞支架制备方法，其特征在于：

其中，所述过氧乙酸和乙醇的混合液中过氧乙酸的终浓度为0.1-0.5%（V/V）乙醇的终浓度为2-10%（V/V），浸泡时间为3小时。

7.如权利要求1所述的具有完整三维结构和脉管网络的小肠脱细胞支架制备方法，其特征在于：

其中，所述哺乳动物为实验用哺乳动物大鼠、犬、猪、兔之中的任意一种。

8.如权利要求1所述的具有完整三维结构和脉管网络的小肠脱细胞支架制备方法，其特征在于：

其中，所述麻醉采用3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉。

9.如权利要求1所述的具有完整三维结构和脉管网络的小肠脱细胞支架制备方法，其特征在于：

其中，所述抗凝药物为注射用低分子肝素，剂量为1000U/kg。