[发明专利]血清中抗原类蛋白的化学发光蛋白芯片方法和试剂盒

权利要求书

1.血清中的抗原类蛋白的化学发光蛋白质芯片检测方法，其特征在于：

采用以下步骤：

（1）获取标准曲线：

所述标准曲线以目标抗原类蛋白的标准品的梯度浓度为横坐标，以梯度浓度的标准品经化学发光检测方法检测到的对应化学发光像素值为纵坐标；

（2）样品检测：

采用与上述化学发光检测方法相同的程序检测待测血清样品中的目标抗原类蛋白的荧光像素值，带入标准曲线的回归方程式中计算出相应的目标抗原类蛋白浓度，乘以血清样品的稀释倍数得出实际的浓度；

并且所述化学发光检测方法采用蛋白质芯片，所述蛋白质芯片至少包括一个检测亚区，一个所述检测亚区检测一份血清样品；

所检测亚区内按斑点状设置有检测斑和对照斑，所述检测斑上固定有所述目标抗原类蛋白的特异性抗体，所述对照斑上固定有牛血清白蛋白作为阴性对照；

一个所述检测亚区内的所述检测斑至少为两个，且固定的特异性抗体浓度相同。

2.根据权利要求1所述的化学发光蛋白质芯片检测方法，其特征在于：

所述化学发光检测方法的步骤如下：

待测血清样本稀释后滴加在所述蛋白芯片的检测亚区上，孵育后形成抗原特异性抗体复合物；用PBST洗涤检测亚区，去除非特异结合物；

加入用PBS稀释的生物素标记的一抗,形成特异性抗体-抗原-一抗复合物；用PBST洗涤4次，去除非特异结合物；

加入用PBS稀释的HRP标记的链酶亲和素，形成特异性抗体-抗原-一抗-HRP标记的链酶亲和素复合物，用PBST洗涤未结合的链酶亲和素；

加入HRP底物发光液，化学成像仪进行扫描得到荧光像素值；

其中所述特异性抗体与所述一抗物种来源不同。

3.根据权利要求1或2所述的化学发光蛋白质芯片检测方法，其特征在于：所述检测亚区内包括四个检测斑，四个对照斑；检测斑和对照斑各排成一列。

4.根据权利要求3所述的化学发光蛋白质芯片检测方法，其特征在于：所述蛋白质芯片具有十个所述检测亚区。

5.根据权利要求1～5任一所述的化学发光蛋白质芯片检测方法，在所述样品检测步骤中，同时以正常血清、目标抗原类蛋白的标准品为对照检验所述标准曲线及所述蛋白质芯片的稳定性和有效性。

6.根据权利要求5所述的化学发光蛋白质芯片检测方法，其特征在于：

所述目标抗原类蛋白为AFP，所述检测斑上固定的特异性抗体为AFP鼠源抗体；所述一抗为生物素标记的兔源一抗。

7.一种用于分析血清中抗原类蛋白的试剂盒，其特征在于：包括蛋白质芯片；所述蛋白质芯片至少包括一个检测亚区，一个所述检测亚区检测一份血清样品；

所检测亚区内按斑点状设置有检测斑和对照斑，所述检测斑上固定有所述目标抗原类蛋白的特异性抗体，所述对照斑上固定有牛血清白蛋白作为阴性对照；

一个所述检测亚区内的所述检测斑至少为两个，且固定的特异性抗体浓度相同。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述检测亚区内包括四个检测斑，四个对照斑；检测斑和对照斑各排成一列。

9.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于：所述蛋白质芯片具有十个所述检测亚区。

10.根据权利要求7～9任一所述的试剂盒，其特征在于：所述蛋白质芯片具有多个所述检测亚区，所述检测亚区之间的分界采用凸起作为物理隔断。

11.根据权利要求7～10任一所述的试剂盒，其特征在于：还包括目标抗原类蛋白的标准品，和/或以所述目标抗原类蛋白的标准品制作的标准曲线或直线回归方程说明书。

12.根据权利要求7～11任一所述的试剂盒，其特征在于：还包括用于化学发光检测的通用试剂；所述通用试剂包括生物素标记的一抗，所述一抗与所述蛋白芯片斑上的所述特异性抗体的物种来源不同。