[发明专利]血清中抗原类蛋白的化学发光蛋白芯片方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及血清抗原检测技术，特别涉及血清中抗原类蛋白的化学发光蛋白芯片方法和试剂盒。

背景技术

肝细胞癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，我国是乙肝大国，肝癌发病率占全球总数的55%，近80%患者确诊时已属中晚期。术后复发转移率高，5年以上长期生存率仅为10%左右。肝癌的早期诊断成为提高患者长期生存率的最佳有效途径。

在肝癌早期诊断研究领域，血清肿瘤分子标志物一直受到普遍关注。目前基础研究已发现100多种标志物与肝癌相关，AFP仍是目前肝癌定性诊断的最佳标志物，对肝癌的确诊、预后推测、疗效判断及复发转移的监测具有良好的临床价值。

目前用于血清肿瘤分子标志物的检测方法包括：传统的放射免疫分析（RIA）、酶联免疫分析（ELISA）、化学发光免疫分析系统、荧光免疫分析系统及电化学发光免疫分析系统等。上述检测方法存在着血量大、检测时间长、费用高等问题。以ELISA为例，每次检测需要患者血清50ul,花费3个多小时。

在癌症类重大疾病的诊断过程中，提供快速、高效、准确的肿瘤标志物分析方法实现准确的早期诊断和及时的后续治疗具有重大意义。

发明内容

本发明基于本领域在检测血清中AFP抗原方面的技术需求及缺陷，提供了一种适合于定量定性检测生物样品中抗原类蛋白的方案，该方案不仅仅适合于检测血清中的AFP抗原，对检测抗原类蛋白物质具有通用性，具有省时、经济、准确且微型化的优点。本发明的技术方案如下：

血清中的抗原类蛋白的化学发光蛋白质芯片检测方法，其特征在于：

采用以下步骤：

（1）获取标准曲线：

所述标准曲线以目标抗原类蛋白的标准品的梯度浓度为横坐标，以梯度浓度的标准品经化学发光检测方法检测到的对应化学发光像素值为纵坐标；

（2）样品检测：

采用与上述化学发光检测方法相同的程序检测待测血清样品中的目标抗原类蛋白的荧光像素值，带入标准曲线的回归方程式中计算出相应的目标抗原类蛋白浓度，乘以血清样品的稀释倍数得出实际的浓度；

并且所述化学发光检测方法采用蛋白质芯片，所述蛋白质芯片至少包括一个检测亚区，一个所述检测亚区检测一份血清样品；

所检测亚区内按斑点状设置有检测斑和对照斑，所述检测斑上固定有所述目标抗原类蛋白的特异性抗体，所述对照斑上固定有牛血清白蛋白作为阴性对照；

一个所述检测亚区内的所述检测斑至少为两个，且固定的特异性抗体浓度相同。

所述化学发光检测方法的步骤如下：

待测血清样本滴加在所述蛋白芯片的检测亚区上，孵育后形成抗原特异性抗体复合物；用PBST洗涤检测亚区，去除非特异结合物；

加入用PBS稀释的生物素标记的一抗,形成特异性抗体-抗原-一抗复合物；用PBST洗涤4次，去除非特异结合物；

加入用PBS稀释的HRP标记的链酶亲和素，形成特异性抗体-抗原-一抗-HRP标记的链酶亲和素复合物，用PBST洗涤未结合的链酶亲和素；

加入HRP底物发光液，化学成像仪进行扫描得到荧光像素值；

其中所述特异性抗体与所述一抗物种来源不同。

所述检测亚区内包括四个检测斑，四个对照斑；检测斑和对照斑各排成一列。

所述蛋白质芯片具有十个所述检测亚区。

所述样品检测步骤中，同时以正常血清、目标抗原类蛋白的标准品为对照检验所述标准曲线及所述蛋白质芯片的稳定性和有效性。

一种用于分析血清中抗原类蛋白的试剂盒，其特征在于：包括蛋白质芯片；所述蛋白质芯片至少包括一个检测亚区，一个所述检测亚区检测一份血清样品；

所检测亚区内按斑点状设置有检测斑和对照斑，所述检测斑上固定有所述目标抗原类蛋白的特异性抗体，所述对照斑上固定有牛血清白蛋白作为阴性对照；

一个所述检测亚区内的所述检测斑至少为两个，且固定的特异性抗体浓度相同。

所述检测亚区内包括四个检测斑，四个对照斑；检测斑和对照斑各排成一列。

所述蛋白质芯片具有十个所述检测亚区。

所述蛋白质芯片具有多个所述检测亚区，所述检测亚区之间的分界采用凸起作为物理隔断。避免样品之间的相互污染。

所述的试剂盒还包括目标抗原类蛋白的标准品，和/或以所述目标抗原类蛋白的标准品制作的标准曲线或直线回归方程说明书。