[发明专利]克隆表达优化的非洲猪瘟VP72基因引物序列、基因、核酸疫苗及构建方法

权利要求书

1.一种克隆表达优化的非洲猪瘟VP72基因引物序列，其特征在于，该引物序列如序列表中的SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所述，其中SEQ ID No.1为非洲猪瘟病毒VP72基因上游引物，SEQ ID No.2为非洲猪瘟病毒VP72基因下游引物。

2.一种克隆表达优化的非洲猪瘟VP72基因，其特征在于，包括序列表中SEQ ID NO.3的基因序列。

3.一种非洲猪瘟核酸疫苗，其特征在于，该疫苗由序列表中SEQ ID NO.3的非洲猪瘟VP72基因和真核表达载体组成。

4.根据权利要求3所述的非洲猪瘟核酸疫苗，其特征在于，所述的真核表达载体可为任何一种DNA疫苗载体。

5.根据权利要求4所述的非洲猪瘟核酸疫苗，其特征在于，所述的真核表达载体为pcDNA3.3。

6.一种非洲猪瘟核酸疫苗的构建方法，包括如下步骤：

（1）合成ASFV VP72基因，并克隆至pUC18克隆载体中，标记为pUC18-ASFV VP72；

（2）根据已经合成的ASFV VP72基因核酸序列，利用核酸引物设计软件设计特异性PCR引物，并在上游引物引入G/A NN序列，引物序列分别如序列表中SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；并从pUC18-ASFV VP72质粒中扩增获得包括NN序列和ASFV VP72全基因的序列，大小为1944bp，如序列表中SEQ ID NO.3所示；

（3）将步骤（1）中扩增获得的ASFV VP72基因经过凝胶电泳、回收后，克隆到pcDNA3.3真核表达载体中，得到重组质粒pcDNA-ASFV-VP72；

（4）用Puv I限制性内切酶将高度纯化的pcDNA-ASFV-VP72线性化后，利用脂质体将其转染到BHK-21细胞中，经过G418持续加压筛选、PCR检测鉴定后，获得阳性细胞系。