[发明专利]小新月菱形硅藻浓缩培养液制备方法和塑料桶培养方法有效
申请号: | 201410073491.2 | 申请日: | 2014-03-03 |
公开(公告)号: | CN103834568A | 公开(公告)日: | 2014-06-04 |
发明(设计)人: | 王培磊 | 申请(专利权)人: | 临沂大学 |
主分类号: | C12N1/12 | 分类号: | C12N1/12;C12R1/89 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 276000 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 新月 菱形 硅藻 浓缩 培养液 制备 方法 塑料桶 培养 | ||
1.一种小新月菱形硅藻浓缩培养液,其特征在于配方如下:NH4NO35克,CaCO31.4克,K2HPO44克,Na2SiO3·9H2O0.5克,MgSO4·7H2O25g,NaHCO34克,九二0植物生长刺激素400国际单位,f/2维生素溶液100毫升,f/2微量元素溶液100毫升,人尿100毫升,海泥抽取液150毫升,牛粪浸出液25毫升,羊粪浸出液15毫升,土壤抽出液30毫升,消毒海水1000毫升;其中f/2微量元素溶液配方:ZnSO4·4H2O23毫克,MnCl2·4H2O178毫克,CuSO4·5H2O10毫克,FeC6H5O7·5H2O3.9克,Na2MoO4·2H2O7.3毫克,CoCl2·6H2O12毫克,Na2EDTA4.35克,纯水1000毫升;f/2维生素溶液配方:维生素B120.5毫克,维生素B1100毫克,维生素H0.5毫克,纯水1000毫升。
2.如权利要求1所述的小新月菱形硅藻浓缩培养液制备方法,其特征在于步骤如下:取NH4NO35克,CaCO31.4克,K2HPO44克,Na2SiO3·9H2O0.5克,MgSO4·7H2O25g,NaHCO34克,f/2微量元素溶液100毫升,人尿100毫升,海泥抽取液150毫升,牛粪浸出液25毫升,羊粪浸出液15毫升,土壤抽出液30毫升,按顺序加入到装有1000毫升海水的三角烧瓶中,煮沸10分钟,冷却;然后加入九二0植物生长刺激素400国际单位,f/2维生素溶液100毫升,充分摇匀,保鲜膜封口,置于4℃冰箱保存,备用即可。
3.一种小新月菱形硅藻塑料桶培养方法,其特征在于包括如下步骤:
培养容器为家庭用的矿泉水桶,容积约20升,无色透明或带浅天蓝色,洗刷干净,后用蒸馏水润洗3遍,用漏斗装入普通消毒海水11.5升,所述消毒海水制备方法:每1立方米海水中加入漂白液200-300毫升,使海水中有效氯含量达到10-20mg/L,空气压缩机充气8-12小时后,用硫代硫酸钠中和余氯;硫代硫酸钠量由余氯的多少来确定,直到滴入淀粉碘化钾液不变色为止;
然后加入浓缩培养液115毫升,充分摇匀5分钟,选择生命力旺盛、无污染的小新月菱形硅藻藻液进行接种,接种密度10×104-15×104cell/mL,瓶口插入两根干净玻璃管,一根较长,插入较深,离瓶底约6厘米,用以充气;另一根较短,约15厘米,两端露出瓶口即可,用以排气;两根玻璃管同样粗细,直径6毫米;最后用酒精棉球擦拭瓶口,用干净的透明胶带封口并将两根玻璃管固定;长的玻璃管上端露出瓶口7-10厘米,用乳胶管或塑胶料管与空气压缩机或气泵相连,充气,充气量不宜太大,以藻细胞浮起不下沉即可;室内培养,空调控温,最佳温度27±2℃,日光灯照射,光照强度10000-12000lx,光/暗周期为16L/8D,即光照16小时,黑暗8小时;培养至第6天,停止充气,揭开透明胶带,用漏斗从瓶口加入2升新鲜培养基,胶带重新封口,充气,继续培养,至第10天,密度增加至400×104-500×104cell/mL,即可停止培养,从瓶口倒出藻液,将矿泉水桶洗刷干净后,加入中药消毒液消毒10-30分钟,后进入下一轮培养。
所述中药消毒液:由以下重量比的物质组成:黄芩7~10份、黄秋葵粉3~5份、鱼腥草3~5份、大黄5~10份、甘草5~10份;将上述药材放入可加热的容器中,加入3~5倍体积的纯净水,煮沸后持续煮30~50分钟,后过滤,沉淀1~2小时,后取澄清液即可;所述黄秋葵粉是清洗干净并烘干后的黄秋葵茎叶、花及籽粒经超微粉碎机粉碎至250目,然后搅匀、灭菌所得。
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