[发明专利]小新月菱形硅藻浓缩培养液制备方法和塑料桶培养方法

说明书

技术领域

本发明属于海洋微藻养殖领域，尤其涉及小新月菱形硅藻浓缩培养液制备方法和塑料桶培养方法。

背景技术

小新月菱形藻属硅藻门，羽纹纲，双菱形目，菱形藻科，菱形藻属，细胞中央膨大成纺锤形，两端渐尖，似月牙形。细胞长12-23μm，宽2-3μm，中央有一细胞核。色素体黄褐色，两片，位于核两侧。分布于世界海水、半咸和淡水水域，我国各海区均有出现。最适盐度范围为25-32％，适温15-20℃，水温超过28℃，停止生长；最适光照强度3000-8000lx，培养时忌直射阳光；适宜pH7-10，最适7.5-8.5。小新月菱形藻俗称“小硅藻”，富含蛋白质、碳水化合物及多种不饱和脂肪酸，是水产经济动物大菱鲆、中国对虾、栉孔扇贝、鲍鱼、马粪海胆和海参等的良好饵料，能促进幼体和亲体生长发育，增强幼苗抵抗力，有重要培养价值。

海水中无机碳的存在形式以HCO₃^-为主(占90％)，而游离的CO₂不足1％。过去人们一直认为，水体中游离CO₂是藻类利用外源无机碳的唯一形式。张学成的工作表明，螺旋藻培养基中添加50-100mmol/LNaHCO₃，不仅可以满足螺旋藻生长的需要，而且有助于保持藻体生长的pH值。林惠民认为，NaHCO₃可作为藻类生长的碳源。我的研究表明小新月菱形硅藻可以利用HCO₃^-作为碳源。

温度、光照、盐度、营养盐等对小新月菱形硅藻生长都有重要影响。氮在细胞代谢中是形成氨基酸、嘌呤、嘧啶、卟啉、氨基糖和胺化合物等的基本元素，因而氮是小新月菱形硅藻生长最重要的营养元素。我的研究显示NH₄NO₃用作氮源无论对细胞密度的增加、不饱和脂肪酸的合成、虾青素的积累等方面的效果均优于NaNO₃和NH₄Cl。人尿中95％是水，5％是可溶性无机盐，其中约2％是尿素。在藻细胞的氮代谢中，氮必须以NH₄⁺的形式与细胞内的碳水化合物衍生的酮酸作用生成氨基酸，再合成蛋白质。已经证实许多藻含有尿素酶，在它的催化作用下，尿素分解出氨被微藻利用，酶功能的差异是造成各种微藻利用尿素能力差异的主要原因。孙凌毅指出微藻对铵盐和尿素的利用强于硝酸盐。张贵杰等研究指出培养牟氏角毛藻以尿素效果最好，硝酸钠次之，氯化铵最差。张青田等认为尿素为氮源培养隐藻效果强于氯化铵。本人研究证实每升培养液中添加2-5mL的尿液对小新月菱形硅藻生长有较好促进作用。

目前，小新月菱形硅藻规模化培养存在的主要问题是藻细胞生长缓慢、倍增时间长、易污染。合适的培养基是实现小新月菱形硅藻高密度培养的基础。小新月菱形硅藻的培养传统上使用f/2培养基，其中不含碳酸氢钠和九二0植物生长刺激素，但我的实验表明，小新月菱形硅藻除了能利用空气中游离的CO₂，还能有效地利用培养液中的HCO₃^-作为碳源。我的实验和研究表明，添加适量的NaHCO₃、九二0植物生长刺激素、海泥抽取液、牛粪浸出液、羊粪浸出液、土壤抽出液及复合维生素等不仅缩短了小新月菱形硅藻倍增时间，而且延长了生长时间，大大提高生长速度，小新月菱形硅藻产量能提高150％。