[发明专利]21个短串联重复序列的复合扩增体系及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种荧光标记的复合PCR扩增体系，该体系同时扩增多个人类基因组DNA短串联重复序列（STR），可以快速准确地进行人类STR分型，进而对法医个体识别和亲子鉴定等提供判断依据。

背景技术

真核细胞基因组中充满了各种重复的DNA序列，广泛存在于染色体着丝粒周围。其中包含2～6个碱基重复单位的DNA区域称为简单序列重复或短串联重复序列（STR）。STR重复单位小，在整个基因组中分布广泛，平均每10000个碱基有一个，并且杂合子个体的两个等位基因在大小上相似，因而易于进行PCR扩增，两个等位基因之间没有差异扩增问题，所以成为广泛使用的DNA重复遗传标记。STR遗传标记的核心序列重复次数在个体间有很大的差异，所以使得STR可以有效地进行人类个体识别。许多学术和商业实验室对大量的STR遗传标记进行了分析，将其应用于疾病基因定位研究、法医个体识别及亲子鉴定等多个方面。

在法医DNA分型中，使用变异性较高的DNA遗传标记，或联合使用大量多态性较低的DNA遗传标记来获得足够的样本识别能力，都可以进行人类个体识别判断。但是小片段的STR等位基因（100-400bp）更适合于法医领域特殊检材的需求。所以基于生物学和技术方面的原因，STR在法医鉴定方面更有优势。

为了保证法医DNA分型标记在司法体系中具有有效性，从1996年开始由美国FBI实验室发起倡议，构建CODIS（Combined DNA Index System）,选出了13个核心STR基因座（CSF1PO、FGA、TH01、TPOX、vWA、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11）作为通用的标准遗传标记。在过去的十多年间，一些商业化的STR试剂盒相继面世，为法庭科学提供了可用的STR遗传标记检测方法，并且随着检测技术的飞速发展，检测STR等位基因的方法也更加灵敏、快速、准确。

发明内容

本发明提供一种21个短串联重复序列的复合扩增体系及试剂盒，具有4色荧光标记，灵敏度极高，低至0.1ng的DNA模板均可检测获得完整的基因分型图谱。本发明所采用的位点组合，均为CODIS基因座，具有极高的个体识别率和非父排除率，本发明可用于法医个体识别、亲子鉴定以及群体遗传学分析，准确性更高，灵敏性更好。

短串联重复序列的复合扩增体系，该复合扩增体系中包括20对引物，可同时扩增20个STR位点：D2S441、D2S1338、D3S1358、D5S818、D6S1043、D7S820、D8S1179、D12S391、D13S317、D16S539、D18S51、D19S433、D21S11、CSF1PO、FGA、Penta D、Penta E、TH01、TPOX和vWA，所述的20对引物分别为：