[发明专利]一种低温生产几丁质酶的菌株及其发酵方法

权利要求书

1.一种低温生产几丁质酶的菌株，其特征在于：命名为交替假单胞菌（Pseudoalteromonas sp.）DL-6，该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位名称：中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏日期：2013年12月13日，其保藏编号为CGMCC NO.8580。

2.一种采用权利要求1所述菌株DL-6低温生产几丁质酶的发酵方法，其特征在于：

（1）将所述菌株接种于固体种子培养基上，在4～30℃培养48-96 h，制成固体种子；

（2）将几丁质酶生产菌在4～30℃于液体种子培养基中进行液体扩大培养，制备成液体一级种子；

（3）将液体一级种子按发酵液体积的1～9%接种量接入液体发酵培养基中，在14～20℃培养48～96 h时，即微生物低温发酵生产几丁质酶结束；或将液体一级种子于液体种子培养基中进行液体扩大培养制备成液体二级种子，将液体二级种子按发酵液体积的1～9%接种量接入液体发酵培养基中，在14～20℃培养48～96 h时，即微生物低温发酵生产几丁质酶结束；

(4)将(3)的发酵液在4,000～8,000 g离心收集液体，获取发酵物。

3.按照权利要求2所述的发酵方法，其特征在于：

根据不同需要和使用对象不同，将(4)得到的发酵物经10000 g离心10min去除菌体，上清液经60%饱和硫酸铵在4℃搅拌过夜，12000g离心30min，收集沉淀，用PBS缓冲液重新溶解沉淀，其中PBS缓冲液的浓度为0.02～0.05M，pH 7.0-8.0，再用相同缓冲液透析除盐，制备成液体酶制剂。

4.按照权利要求2所述的发酵方法，其特征在于：其中固体种子培养基、液体种子培养基、发酵培养基分别为：

（1）固体种子培养基：牛肉膏1.0 g；胰蛋白胨5.0 g；琼脂粉15.0 g；海水1.0L，121℃高压蒸气灭菌30 min；

（2）液体种子培养基：牛肉膏1.0 g；胰蛋白胨5.0 g；海水1.0L，121℃高压蒸气灭菌30 min；

（3）发酵培养基：胶体或细粉几丁质5.0 g；蛋白胨5.0 g；海水1.0L，121℃高压蒸气灭菌30 min。