[发明专利]一种低温生产几丁质酶的菌株及其发酵方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物学、酶工程、发酵工程、生物化学等领域，具体涉及一种交替假单胞菌属的海洋细菌，特别是一种低温生产几丁质酶的菌株及其发酵方法研究。该发明生产的几丁质酶主要应用于食品工业、酿造、发酵、医药等行业。

背景技术

几丁质酶是催化几丁质水解生成N-乙酰氨基葡萄糖的酶。几丁质(Chitin)又称甲壳质或甲壳素，是一种由N-乙酰氨基葡萄糖以β-1,4-糖苷键连接而成的生物直链多聚物，广泛分布与自然界。自然界每年生成的几丁质约一百亿吨，陆地储量仅次于纤维素，海洋环境中含量最丰富的多糖。

目前已确定出3种以氢键相连的天然结晶形态：含量最大的α-几丁质，由两条反向平行链组成，多氢键相连，浸水不胀；β-几丁质，由两条同向平行链构成，分子链间的氢键较小几丁质少的多，遇水会膨胀；γ-几丁质，为三条链，两条同向，一条反向，类似于α-和β-几丁质的混和晶体。几丁质由于分子内氢键较强，所以稳定性强、溶解性能差(不溶于水、稀酸、稀碱和一般有机溶剂)。

几丁质若脱乙酰化即成壳聚糖(chitosan)，是啤酒酵母的子囊孢子外壳、毛霉细胞壁的主要成分。壳聚糖的溶解性大为改善，虽不能直接溶于水但却能溶于酸或酸性水溶液中。几丁质分子中的氨基并非全部置换成N-乙酰氨基基团，分子中还存在一些游离的氨基基团，几丁质正是通过这种呈碱性的氨基基团与适当的离子基团如β-葡萄糖胺、特定蛋白质等结合成络合物或共价化合物。几丁质及其衍生物在食品、医药、化工、生物、农业、纺织、印染、造纸、环保等众多领域中均具有极其重要的用途。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能低温生产几丁质酶的新菌种，并提供该新菌种的分离培养方法和发酵研究。

本发明所述的低温生产几丁质酶生产菌株DL-6，即Pseudoalteromonas sp.DL-6菌株（CGMCC NO.8580）分离自辽宁省大连星海湾的海洋底泥中，经形态学、16S rDNA分析表明它属于假交替单胞菌属(又称交替假单胞菌属,下同)，命名为低温生产几丁质酶菌株DL-6，即Pseudoalteromonas sp.DL-6。申请人已针对该菌 发展了一套培养技术，能从该菌稳定低温发酵生产几丁质酶。该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位名称：中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏日期：2013年12月13日，其保藏编号为CGMCC NO.8580。

所述低温几丁质酶菌株的生物化学特征为：

菌落形态特征为：菌落为淡黄色、不透明、表面光滑、边缘整齐、易挑取。通过简单染色、革兰氏染色、荚膜染色、芽孢染色等方法对该菌株生物学特性进行初步鉴定，结果表明该菌株为细菌，杆状、0.1-0.5μm×1.3-2.0μm、革兰氏阴性、无荚膜、无芽孢、端生鞭毛。遗传学特征：

所述低温生产几丁质酶菌株DL-6，即Pseudoalteromonas sp.DL-6的16S rDNA全基因碱基序列（表1）；菌株16S rDNA全基因序列共1450bp(Genbank登录号为：KF208362)；

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