[发明专利]转基因水稻科丰2号外源基因纯合/杂合状态的PCR检测引物、检测方法及试剂盒有效
| 申请号： | 201410081524.8 | 申请日： | 2014-03-06 |
| 公开（公告）号： | CN103834736A | 公开（公告）日： | 2014-06-04 |
| 发明（设计）人： | 宛煜嵩;梁利霞;张秀杰;朱祯;金芜军;苗朝华;李亮;高进 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京康思博达知识产权代理事务所(普通合伙) 11426 | 代理人： | 余光军 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转基因 水稻 号外 基因 状态 pcr 检测 引物 方法 试剂盒 | ||
1.用于检测转基因水稻科丰2号外源基因纯合/杂合状态的PCR检测引物，其特征在于：其核苷酸序列分别为SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。
2.一种转基因水稻科丰2号外源基因纯合/杂合状态的PCR检测方法，其特征在于，该方法包括：（1）提取待检测水稻样品的DNA；（2）以提取的DNA为模板，以SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的核苷酸序列为扩增引物，建立PCR扩增体系并进行PCR扩增；（3）如果仅扩增出一条401bp片段，则待检测的样品为纯合转基因水稻科丰2号；如果扩增出401bp和541bp的两条片段，待检测的样品为杂合转基因水稻科丰2号；如果只扩增出一条541bp片段，待检测的样品为非转基因水稻。
3.按照权利要求2所述的PCR检测方法，其特征在于，所述的PCR扩增体系按照以下方式建立：反应体系的总体积为25.0μL，其中，5×Go Taq缓冲液5.0μL，0.025U Go Taq DNA聚合酶0.5μL，10mmol/L dNTP2.0μL，10μmol/L SEQ ID No.2所示的引物0.75μL，10μmol/L SEQ ID No.3所示的引物0.75μL，10μmol/L SEQ ID No.4所示的引物0.5μL，25ng/μLDNA模板2μL，余量为双蒸水。
4.按照权利要求2所述的PCR检测方法，其特征在于，所述的PCR扩增条件为：94℃变性5min；94℃30s，58℃30s，72℃30s，35个循环；72℃延伸7min。
5.一种转基因水稻科丰2号外源基因纯合/杂合状态的PCR检测试剂盒，包括：5×Go Taq缓冲液，Go Taq DNA聚合酶，dNTP，PCR检测引物和双蒸水；其特征在于：所述PCR检测引物的核苷酸序列为SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。
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