[发明专利]一种同时检测人的冠状病毒229E、OC43、NL63的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种同时检测人的冠状病毒229E、OC43、NL63的方法，其特征在于是含内质控的一步法多重荧光RT-PCR，其特异性引物和探针序列分别为：

1)SEQ NO：1、2、4、5、7、8、10、11所示的引物；

2)SEQ NO：3、6、9、12所示的探针。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于如SEQ NO：3所示的人冠状病毒229E的N基因探针5’端由FAM标记，3’端由BHQ1标记；如SEQ NO：6所示的人冠状病毒OC43的N基因探针5’端由JOE标记，3’端由BHQ1标记；如SEQ NO：9所示的人冠状病毒NL63的N基因探针5’端由ROX标记，3’端由BHQ2标记；如SEQ NO：12所示的质控基因LDHA基因探针5’端由CY5标记，3’端由BHQ2标记。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述多重荧光RT-PCR的反应体系：

a)反应缓冲液；

b)反应酶；

c)SEQ NO：1、2、4、5、7、8、10、11所示的引物；

d)SEQ NO：3、6、9、12所示的探针

e)无RNA酶的水补足体系要求的体积。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述多重荧光RT-PCR的反应条件如下：

a)四个荧光通道的设置；

b)反转录的温度与时间；

c)预热的温度与时间；

d)热循环(预热温度与时间、退火温度与时间、荧光收集温度、循环数)；

e)以界定的Ct值来判定检测结果。

5.如权利要求1所述方法在检测食品及原料、环境样本中人的冠状病毒229E、OC43、NL63中的用途。

6.权利要求1所述的引物和探针序列在制备人的冠状病毒229E、OC43、NL63的检测试剂中的应用。

7.一种同时检测人的冠状病毒229E、OC43、NL63的试剂盒，其特征在于所述试剂盒中含有特异性引物和探针，其序列分别为：

1)SEQ NO：1、2、4、5、7、8、10、11所示的引物；

2)SEQ NO：3、6、9、12所示的探针。

8.权利要求7所述的试剂盒在制备人的冠状病毒229E、OC43、NL63的诊断试剂中的应用。