[发明专利]基于荧光检测方法的原位葡萄糖检测膜的制备方法

权利要求书

1.一种基于荧光检测方法的原位葡萄糖检测膜的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）准备制备材料葡萄糖指示剂分子

所述的葡萄糖指示剂分子能特异性的与葡萄糖结合，在与葡萄糖结合后，该分子的荧光强度降低；当体系中的该分子数量一定时，通过观测该类分子的总荧光强度，能够得知该分子所在环境的葡萄糖浓度； 

 2）准备制备材料载体

所述载体为葡萄糖指示剂分子载体，采用高分子聚合物膜；

所述载体通过使用高分子化合物的单体混合物，在加热或紫外光照射的情况下进行聚合得到共聚的高分子载体膜； 

3）将步骤1）中准备的葡萄糖指示剂分子共价链接到步骤2）中准备的载体膜上；

具体共价链接步骤为，将载体膜在常压室温下，浸入含有0.1-1%甲醛，0.005-0.10M盐酸，和10mM-100 mM葡萄糖指示剂分子的溶液中，搅拌12-36小时；加PBS缓冲溶液充分洗涤，得到有共价连上葡萄糖指示剂分子的高分子膜；即基于荧光检测方法的原位葡萄糖检测膜。

2.根据权利要求1所述的基于荧光检测方法的原位葡萄糖检测膜的制备方法，其特征在于：制得的基于荧光检测方法的原位葡萄糖检测膜经过裁剪，能够植入体内，作为葡萄糖光学传感器的活性膜使用。

3.根据权利要求1所述的基于荧光检测方法的原位葡萄糖检测膜的制备方法，其特征在于：在所述葡萄糖指示剂分子共价链接到载体膜上之后，葡萄糖指示剂分子仍然保留认知葡萄糖的特异性和荧光光学活性。

4.根据权利要求1所述的基于荧光检测方法的原位葡萄糖检测膜的制备方法，其特征在于：步骤1）中所述的葡萄糖指示剂分子是基于硼酸的衍生物 ，该分子能够通过标准的Mannich反应与载体高分子膜共价链接。

5.根据权利要求1所述的基于荧光检测方法的原位葡萄糖检测膜的制备方法，其特征在于：所述基于硼酸的衍生物为2,3’-二羟基硼-4 - 羟基偶氮苯。

6.根据权利要求1所述的基于荧光检测方法的原位葡萄糖检测膜的制备方法，其特征在于：步骤2）中所述载体，采用聚丙烯酸羟乙酯hydroxyethylmethacrylate或其他类似的高分子载体，包括聚丙烯酸树脂及其共聚物。

7.根据权利要求1所述的基于荧光检测方法的原位葡萄糖检测膜的制备方法，其特征在于：步骤2）中载体膜的制备为，所述载体通过使用混合单体，在加热或紫外光照射的情况下进行聚合得到载体膜，例如，在常压室温下，使用1.0M、2.0M、2.5M或 3.0M 的HEMA水溶液，其中载体单体HEMA与有活性基团的单体AEMA的比例相应调控在1:3、1:10、1:20和1：33，在pH6-9磷酸缓冲溶液的条件下，将上述HEMA水溶液旋涂单晶硅晶圆表面，厚度为50-500 微米；365 nm UV光照6-36小时聚合，由此产生的水凝胶；用水充分洗涤以除去未反应的单体；将该水凝胶进行干燥，得到载体膜。

8.根据权利要求7所述的基于荧光检测方法的原位葡萄糖检测膜的制备方法，其特征在于：所述载体膜中的活性基团来自AEMA、其他活性类基团或其他携带有活性基团的单体，所述AEMA提供了一个悬挂的氨基，从而能够共价的来修饰这个高分子载体膜，携带有活性基团的单体为aminopropylmethacrylate即APMA，除此类伯氨类分子外，仲氨类分子也能使用；其他携带有活性基团为巯基即-SH、羧酸基即-COOH、羟基即-OH、醛基即-CHO和氰基即-CN。

9.根据权利要求7所述的基于荧光检测方法的原位葡萄糖检测膜的制备方法，其特征在于：所述的载体膜是疏水性的。