[发明专利]一种同管检测HTLV-I和HTLV-II前病毒的引物和方法

权利要求书

1.一种用于检测HTLV-I和HTLV-II前病毒的引物，包括检测HTLV-I前病毒的特异性引物（SEQ NO1和SEQ NO2）及探针（SEQ NO3）和检测HTLV-II前病毒的特异性引物（SEQ NO4和SEQ NO5）及探针（SEQ NO6），其中：

(i)    检测HTLV-I前病毒的特异性引物及探针：

SEQ NO1：CCCATTGGCTCCTGTGAAAG；

SEQ NO2：TTGAGACAGCGCCACGAAC；

SEQ NO3：JOE-TCTCGGACTTTTGCATGGCCTCTCC-TAMARA

(ii)   检测HTLV-II前病毒的特异性引物及探针：

SEQ NO4：TTGCCATACCTGTCAAACCATC；

SEQ NO5：CTGAAGAACGGCGCTGATAGTC；

SEQ NO6：FAM-CTTCTCCGGTGCGGTTTCCGTCT-TAMARA。

2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于，在检测HTLV-I和HTLV-II前病毒时，所述的引物同时被使用，并被放置在同一个反应管中。

3.根据权利要求1所述的引物，其特征在于，在总反应体积为25ul时，引物和探针的使用量为：引物SEQ NO1、SEQ NO 2、SEQ NO4、SEQ NO 5各0.6ul、探针SEQ NO3和SEQ NO 6各0.3 ul。

4.根据权利要求1所述的引物，其特征在于，所述的引物参与的反应程序为95℃ 5min预变性；95℃ 15s，59℃ 35s循环40次。

5.一种同管检测HTLV-I和HTLV-II前病毒的方法，其特征在于包括：

(1)提取样本中的DNA；

(2)以步骤(1)中的DNA作为模板，在同一PCR管同时加入检测HTLV-I前病毒的引物及探针和检测HTLV-II前病毒的引物及探针，并通过Real-time PCR反应对样本进行检测，其中：

(i) 检测HTLV-I前病毒的特异性引物及探针：

SEQ NO1：CCCATTGGCTCCTGTGAAAG；

SEQ NO2：TTGAGACAGCGCCACGAAC；

SEQ NO3：JOE-TCTCGGACTTTTGCATGGCCTCTCC-TAMARA

(ii) 检测HTLV-II前病毒的特异性引物及探针：

SEQ NO4：TTGCCATACCTGTCAAACCATC；

SEQ NO5：CTGAAGAACGGCGCTGATAGTC；

SEQ NO6：FAM-CTTCTCCGGTGCGGTTTCCGTCT-TAMARA；

(3) 根据结果来分析样本是否感染HTLV病毒。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，Real-time PCR的反应体系为25ul，包括2*qPCR MIX 12.5ul、引物SEQ NO1、SEQ NO 2、SEQ NO4、SEQ NO 5各0.6ul、探针SEQ NO3和SEQ NO 6各0.3 ul、灭菌水7.5ul、DNA模板2 ul。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，Real-time PCR反应程序为：95℃ 5min预变性；95℃ 15s，59℃ 35s循环40次。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，对检测结果分析包括：若样本产生一条扩增曲线，且CT值≤38，则样本为HTLV阳性，且根据相对应的探针，可判断样本所感染的HTLV基因型；若样本未产生扩增曲线，则判定样本为阴性。