[发明专利]一种同管检测HTLV-I和HTLV-II前病毒的引物和方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检验领域，具体涉及一种同管检测HTLV-I和HTLV-II前病毒的引物和方法。

背景技术

人类T淋巴细胞白血病病毒（Human T-cell lymphotropic virus, HTLV）是1980年美国人Gallo首先从皮肤型T细胞淋巴瘤患者体内发现的第一种人类逆转录病毒，按基因组学及血清学反应可分为1型（HTLV-I）和2型（HTLV-II）。该病毒为球型颗粒，内部由RNA核蛋白及围绕在外的20面体蛋白衣壳组成，最外层具有包膜结构，表面镶嵌有糖蛋白。目前全世界大约1000到2000万人感染HTLV病毒，而在我国的北京、广西、江西、新疆、柳州、合肥和四川等10多个省市已发现了HTLV感染病例，同时某些沿海地区也出现了局部小规模流行。

    HTLV感染细胞主要通过细胞间感染的方式，游离病毒颗粒是没有感染能力的。HTLV感染细胞与未感染细胞建立突触，进而使病毒蛋白和RNA染色体组进入靶细胞。通过逆转录酶使病毒RNA逆转录为cDNA，同时这种前病毒DNA被整合到宿主细胞，最终引起成人T细胞白血病、热带痉挛性瘫痪及其他相关神经疾病的产生。

HTLV病毒的传播途径主要有输血传播、母乳传播及性传播三种，而迄今有效的治疗药物和预防性疫苗尚未研制成功。因此，唯一积极的控制办法就是及时发现HTLV感染者，并采取措施切断其传播途径。

目前较为常用的检测方法是采用ELISA法检测HTLV抗体，其它还有间接免疫荧光法、蛋白印迹试验及重组免疫印记等。但研究显示并非所有的HTLV感染者都会产生抗体，且血液标本中尚存在单细胞感染，因此血清学检测存在一些假阳性和假阴性问题，特异性较差，无法很好地解决上述问题。本检测方法在血清学变化之前即可检测是否有HTLV感染，大幅度缩短了窗口期，同时相对于常规的血清学检测方法具有检测周期短，特异性高，准确度高，灵敏度高，条件依赖少，污染风险低等优点。检测结果将有助于临床筛选，监测患者HTLV前病毒载量的变化及限制HTLV病毒的传播。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测HTLV-I和HTLV-II前病毒的引物，包括检测HTLV-I前病毒的特异性引物（SEQ NO1和SEQ NO2）及探针（SEQ NO3）和检测HTLV-II前病毒的特异性引物（SEQ NO4和SEQ NO5）及探针（SEQ NO6），其中：

(i)     检测HTLV-I前病毒的特异性引物及探针：

SEQ NO1：CCCATTGGCTCCTGTGAAAG；

SEQ NO2：TTGAGACAGCGCCACGAAC；

SEQ NO3：JOE-TCTCGGACTTTTGCATGGCCTCTCC-TAMARA

(ii)    检测HTLV-II前病毒的特异性引物及探针：

SEQ NO4：TTGCCATACCTGTCAAACCATC；

SEQ NO5：CTGAAGAACGGCGCTGATAGTC；

SEQ NO6：FAM-CTTCTCCGGTGCGGTTTCCGTCT-TAMARA。

进一步地，在检测HTLV-I和HTLV-II前病毒时，所述的引物同时被使用，并被放置在同一个反应管中。

进一步地，在总反应体积为25ul时，引物和探针的使用量为：引物SEQ NO1、SEQ NO 2、SEQ NO4、SEQ NO 5各0.6ul、探针SEQ NO3和SEQ NO 6各0.3 ul。

进一步地，所述的引物参与的反应程序为95℃ 5min预变性；95℃ 15s，59℃ 35s循环40次。

本发明还提供一种同管检测HTLV-I和HTLV-II前病毒的方法，包括：

(1)提取样本中的DNA；

(2)以步骤(1)中的DNA作为模板，在同一PCR管同时加入检测HTLV-I前病毒的引物及探针和检测HTLV-II前病毒的引物及探针，并通过Real-time PCR反应对样本进行检测，其中：

(i)   检测HTLV-I前病毒的特异性引物及探针：

SEQ NO1：CCCATTGGCTCCTGTGAAAG；

SEQ NO2：TTGAGACAGCGCCACGAAC；

SEQ NO3：JOE-TCTCGGACTTTTGCATGGCCTCTCC-TAMARA

(ii)  检测HTLV-II前病毒的特异性引物及探针：