[发明专利]LC3-I抗体的制备方法及其应用在审
| 申请号： | 201410091349.0 | 申请日： | 2014-03-07 |
| 公开（公告）号： | CN103833850A | 公开（公告）日： | 2014-06-04 |
| 发明（设计）人： | 张海;赵勇;师长宏;张彩勤 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;G01N33/68;G01N33/577 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 710032 陕西省西安市*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | lc3 抗体 制备 方法 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种LC3-I抗体的制备方法，其特征在于，包括如下操作步骤：
S1：抗原LC3-I对纯种BALB／c小鼠进行免疫处理，无菌操作取出脾脏，制备脾细胞悬液待用；
S2：取对数生长的SP2／0骨髓瘤细胞与步骤S1中制得的脾细胞按1∶5的比例混合，加入PEG溶液，SP2／0骨髓瘤细胞与脾细胞融合形成杂交瘤细胞并采用HAT选择培养液进行选择培养，HAT选择培养液维持7～10天后换用HT培养液，再维持2周，改用一般培养液培养；
S3：在步骤S2选择培养期间检测LC3-I抗体，筛选出所需要的杂交瘤细胞，上述杂交瘤细胞接种小鼠腹腔，腹水经纯化后获得抗LC3-I抗体。
2.如权利要求1所述LC3-I抗体的制备方法，其特征在于，步骤S1中以饥饿处理的RAW264.7细胞cDNA为模板进行PCR扩增，LC3-I基因克隆入原核表达载体后进行表达、纯化，获得LC3-I抗原。
3.如权利要求1所述LC3-I抗体的制备方法，其特征在于，步骤S2中在选择培养期间，每2～3天换一半培养液，杂交瘤细胞布满孔底1／10面积时，开始检测特异性抗体，检测采用酶联免疫吸附试验进行。
4.如权利要求1制取的LC3-I抗体的应用，其特征在于：是将LC3-I抗体作为用于研究自噬的形成及作用机制的工具。
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