[发明专利]提取结核杆菌DNA的方法及检测其多重耐药性的试剂盒在审
申请号: | 201410093113.0 | 申请日: | 2014-03-13 |
公开(公告)号: | CN103911365A | 公开(公告)日: | 2014-07-09 |
发明(设计)人: | 李沛祥 | 申请(专利权)人: | 南京爱必梦生物材料有限公司 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12Q1/68 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 210000 江苏省南京市浦口*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 提取 结核杆菌 dna 方法 检测 多重 耐药性 试剂盒 | ||
1.提取结核杆菌DNA的方法,其特征在于,包括以下步骤:
a)、碱处理,将生物样本(痰液)加入NaOH溶液内液化处理;
b)、一次离心,将上述液化后的生物样本置入离心机内离心,弃上清液;
c)、Tris缓冲液洗涤沉淀,弃去上清液;
d)、加入DNA提取液,沸水浴5-15分钟;
e)、二次离心,将上步所得液体置于离心机内离心,收集上清液,即得结核杆菌DNA。
2.根据权利要求1所述的提取结核杆菌DNA的方法,其特征在于,所述碱处理中的NaOH溶液的浓度为4%,碱处理的温度为37℃,碱处理的时间为30分钟。
3.根据权利要求1所述的提取结核杆菌DNA的方法,其特征在于,所述一次离心和二次离心的转速均为12000转,时长为10分钟。
4.根据权利要求1所述的提取结核杆菌DNA的方法,其特征在于,所述DNA提取液包括以下浓度的组分:
5.一种检测结核分枝杆菌多重耐药性的试剂盒,其特征在于,包括:痰液样本液化剂、DNA提取液、qPCR反应液、多重耐药基因检测引物、核苷酸探针、各耐药基因野生型及各耐药基因变异型序列检测标准品;
所述多重耐药基因检测引物的DNA序列为SEQ ID Nos:1-79;
所述核苷酸探针的序列为SEQ ID Nos:80-92;
所述各耐药基因野生型及各耐药基因变异型序列检测标准品的序列为SEQ ID Nos:93-138。
6.根据权利要求5所述的一种检测结核分枝杆菌多重耐药性的试剂盒,其特征在于,所述痰液样本液化剂为浓度为4%的NaOH溶液。
7.根据权利要求5所述的一种检测结核分枝杆菌多重耐药性的试剂盒,其特征在于,所述DNA提取液包括以下浓度的组分:
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