[发明专利]一种同位素稀释LA-ICP-MS原位测定生物组织样品中铁含量的方法

权利要求书

1.一种同位素稀释LA-ICP-MS原位测定生物组织样品中铁含量的方法，其特征在于所述方法包括：对生物切片样品采用组织防脱材料构建样品边界的方式，在边界内加入定量的同位素稀释剂与组织样品进行同位素充分交换；优化了同位素稀释剂的添加方式、同位素平衡时间、以及原位的同位素比测量技术的条件；采用同位素稀释法-LA-ICP-MS技术对实验室自行制备的均匀的山羊脑和牛肝组织切片样品中的铁进行了原位定量测量。

2.根据权利要求1所述的同位素稀释LA-ICP-MS原位测定生物组织样品中铁含量的方法，其特征是按照以下步骤进行：

(1)山羊脑和牛肝组织切片样品的制备：将山羊脑组织样品经过混合、匀浆，在-20℃下冷冻后，采用全自动冷冻切片机制作20～50μm厚的山羊脑组织切片样品；称取牛肝粉末标准样品分散在30％的明胶水溶液中，涡旋均匀化混合5分钟后，用移液管取样20～50μL滴加到载玻片上，室温下干燥后形成一个模拟的组织切片样品，由载玻片在滴加样品前后分别称重的质量变化得到模拟切片的质量；

(2)组织防脱边界的构建及同位素稀释剂的加入：使用免疫组化笔分别在山羊脑和牛肝组织切片周围绘制一个边界，用移液器往边界内的组织样品上分两次滴加约0.1～0.3g的浓缩⁵⁷Fe稀释剂溶液；

(3)组织切片样品与稀释剂达到同位素平衡的条件优化：采用组织防脱技术分别将4个山羊脑组织切片样品构建边界，然后在边界内滴加同位素稀释剂溶液，分别保持3，6，9，12分钟后，蒸干溶剂以控制同位素交换的时间，然后测定⁵⁶Fe／⁵⁷Fe的比值，根据计算的山羊脑组织切片样品中Fe元素含量，确定最佳同位素平衡时间为3分钟；

(4)LA-ICP-MS测量经过同位素交换后的组织切片样品中⁵⁶Fe／⁵⁷Fe的比值及定量计算：激光剥蚀系统采用线扫描方式，平行测定5片组织样品，每片样品扫描4～7条线，每条线长度约为0.8～1.5cm；选取⁵⁶Fe和⁵⁷Fe做为待测同位素，根据同位素稀释法计算公式得到样品中铁元素的含量。

3.根据权利要求2所述的同位素稀释LA-ICP-MS原位测定生物组织样品中铁含量的方法，其特征在于：所述步骤(3)中所用的⁵⁷Fe同位素稀释剂的溶液采用去离子水作为溶剂，在同位素平衡过程中采用电加热板蒸发掉稀释剂中的溶剂，从而控制同位素交换的时间，待溶剂临近将蒸干时，放置室温下自然干燥待测。

4.根据权利要求2所述的同位素稀释LA-ICP-MS原位测定生物组织样品中铁含量的方法，其特征在于：所述步骤(4)中激光烧蚀仪LSX213的工作条件为：激光能量2.0～4.5mJ／脉冲，扫描频率10～20Hz，光斑尺寸50～200μm，扫描速度30～60μm／s，烧蚀方式：线扫描。

5.根据权利要求2所述同位素稀释LA-ICP-MS原位测定生物组织样品中铁含量的方法，其特征在于：所述步骤(4)中电感耦合等离子体质谱仪Element2的分辨率为4000，消除同多原子离子⁴⁰Ar¹⁶O⁺对⁵⁶Fe⁺的谱线干扰；工作条件为：功率1100～1400W，样品气流速0.90～1.20L／min，辅助气流速1.00～1.40L／min，冷却气流速15～20L／min，采样时间0.01～0.03s，峰采集个数100～150。