[发明专利]羊传染性脓疱病毒细胞弱毒疫苗耐热冻干保护剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种活疫苗的耐热冻干保护剂及其制备方法，特别涉及用于羊传染性脓疱病毒细胞弱毒疫苗制备的耐热冻干保护剂及其制备方法。本发明属于生物医药技术领域。 

背景技术

冻干保护剂及其制备工艺是活疫苗生产中的一项关键技术，对疫苗的保存，运输和使用有很大影响。目前，动物疫苗中，活的冻干疫苗占相当大的比例，国内常用的保护剂主要为牛奶、蔗糖、明胶等，虽然其外形稳定、易溶性良好、成本低廉、保存方便，但其热稳定性和保护功能差，而且产品对冷链的要求高。2～8℃条件下，保存期只有3～6个月，大多需要在-15℃以下保存，这给疫苗的储存和运输带来很大的困难。加上基础兽医防疫部门缺乏必要的冷冻和冷藏设施，容易造成因保存条件不完善而导致疫苗是失活，效价降低。造成免疫失败，给养殖业造成巨大的经济损失。发达国家早在20世纪80年代就已开始进行耐热冻干保护剂的研究。目前国外生产的弱毒疫苗基本都采用耐热冻干保护剂生产疫苗，但研制方法和耐热冻干保护剂的配方未见详细报道。我国在耐热冻干保护剂方面的研究起步较晚，虽然目前在这方面的研究取得了一定的成果，但产品配套还不齐全，且与国外同类产品相比仍有一定差距， 

中国加入WTO后，我国畜牧业得到快速发展，我国动物及动物产品进出口贸易的不断扩大，疫苗的使用量和种类也随之增加，加上中国市场巨大，国外生物制品涌入，市场竞争加剧。为了促进本国生物制品业的生存和发展，加快新型有效的耐热保护剂的研究和应用，提高动物疫苗的质量，切实做好动物疫病防控工作，迫在眉睫。 

近年来，羊传染性脓疱病（Orf）俗称“羊口疮”，在世界各养羊国家和地区的羊群中均有发生，被认为呈全球性流行的趋势。该病的发生非常频繁，且感染状况也日益严重，甚至表现全群暴发流行的趋势。在国内许多大型的种羊场 都有该病流行，给养羊业造成了严重的经济损失。虽然，羊口疮弱毒疫苗在青海省畜牧兽医科学院兽医研究和甘肃省畜牧兽医研究所均被研制过，并申报过地方新兽药证书，但因制造工艺复杂、落后，疫苗冻干保护剂组方简单，使得所制备的使得所制备的到的疫苗对抗原的保护性差，且存在保存、运输不便等缺点。目前，市面上很难买到羊口疮疫苗。 

本发明针对羊传染性脓疱病毒细胞弱毒疫苗的特性，成功制备了一种羊传染性脓疱病毒细胞弱毒的耐热冻干保护剂，该冻干保护剂可以使该疫苗在2～8℃保存24个月，病毒效价不发生大的改变。依据该疫苗的冻干工艺进行冻干试验，疫苗产品冻干前后病毒损失率为0.3个滴度，用该冻干保护剂制备的疫苗在37℃条件下保存30d，病毒损失率仅为1.0个滴度，且用该耐热型冻干保护剂制备的疫苗，其塑形性和复溶性都非常好。 

因此，本发明解决了羊传染性脓疱病毒细胞弱毒疫苗仅能在-15℃条件下保存和运输的瓶颈技术，使疫苗的储存、运输更为方便。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种羊传染性脓疱病毒细胞弱毒疫苗耐热冻干保护剂的配方及其制备方法。本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种配制方法简单、成本低、能够应用于规模化生产、并具有良好抗原保护性能的羊传染性脓疱病毒细胞弱毒疫苗耐热冻干保护剂，以便降低羊传染性脓疱病毒细胞弱毒疫苗保存条件，延长保存期，从而降低疫苗的保存和使用成本。 

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术途径来实现的： 

本发明的一种羊传染性脓疱病毒弱毒疫苗耐热冻干保护剂中含有：海藻糖30～70g/L，脱脂奶粉10～30g/L，聚乙烯吡咯烷酮10～30g/L，明胶5～15g/L，精氨酸0.5～4g/L，维生素C1～5g/L，剩余成分为超纯水。 

优选的，各组分的重量体积百分比为：海藻糖50g/L，脱脂奶20g/L，聚乙烯吡咯烷酮20g/L，明胶10g/L，精氨酸1.5g/L，维生素C2.5g/L，剩余成分为超纯水。 

本发明所要解决的另一个技术问题是提供上述羊传染性脓疱病毒弱毒疫苗耐热冻干保护剂的制备方法。 

一种羊传染性脓疱病毒弱毒疫苗耐热冻干保护剂的制备方法包括如下步骤 如下（按配制1L计算）： 

1）称取海藻糖30～70g，脱脂奶粉10～30g，聚乙烯吡咯烷酮10～30g，明胶5～15g，将称取得到的上述物质加入超纯水中加热至50～60℃溶解后，于116℃灭菌30分钟后制成A液； 

2)称取精氨酸0.5～4g，维生素C1～5g溶解于超纯水中，用孔径为0.22μm滤膜过滤除菌后制成B液； 

3）将完成除菌的A液和B液混合，定容至1L，即为所述的耐热冻干保护剂。