[发明专利]一种利用LAMP快速检测中国番茄黄化曲叶病毒的方法

权利要求书

1.一种利用LAMP快速检测中国番茄黄化曲叶病毒的方法，其特征在于通过如下步骤实现：

（1）采用CTAB法提取待测植株叶片的总DNA；

（2）以DNA为模板，采用以下特异性引物组进行LAMP扩增，得到扩增产物：

FIP 5′-ACTACAACCTGAGGAAAGCGTTAGTCCAGATTTTGCAGGTTAG-3′

BIP 5′-ACTTGTAATGTGATTATGTCGTGGTCAAAAATCCCCTTTATTTCAAGA-3′

F3 5′-AACGCAAGGTCTGAGGAT-3′

B3 5′-AGCAGAGAATGGCGTTTA-3′

（3）检测

电泳检测：取5 μL扩增产物经2% 琼脂糖凝胶在0.5×TBE缓冲液和120V电压条件下电泳30 min，感染TYLCCNV的样品为明亮的呈弥散状的核酸泳带； 

荧光染色：在扩增产物中加入SYBR GreenⅠ(1:1000) 2 μL，1-5 min后观察结果，感染TYLCCNV的样品由橙色变成绿色，未感染TYLCCNV的样品及空白对照保持染料的橙色。

2.根据权利要求1所述的一种利用LAMP快速检测中国番茄黄化曲叶病毒的方法，其特征在于步骤（2）LAMP扩增的反应体系为25 μL，所述反应体系中各组分的含量为：模板DNA 1.0 μL，其他组分的终浓度：Bst RNA 聚合酶8 U、 1×Reaction Buffer、2.4 mM/L MgSO₄、0.2 mM/L dNTPs、0.8 M Betaine，特异性引物组的浓度分别为：FIP/BIP 1.6 μM/L、F3/B3 0.2 μM/L，加ddH₂O补足25 μL，混匀，于63℃水浴锅中反应60 min，之后80 ℃下灭活 10 min 结束反应。