[发明专利]检测BRAF基因突变的方法及其试剂盒

权利要求书

1.一对用于检测BRAF基因第15号外显子突变V600E和V600K的引物对，其特征在于，包括：

1）如SEQ ID NO.1所示的上游序列和如SEQ ID NO.2所示的下游序列；或者

2）至少与SEQ ID NO.1所示的上游序列80%相同的序列和至少与SEQ ID NO.2所示的下游序列80%相同的序列。

2.一种用于检测野生型BRAF基因的探针，其特征在于，包括：包含SEQ ID NO.3所示序列的探针。

3.如权利要求2所述的探针，其特征在于：所述探针的两端还分别标记有荧光报告基团和荧光淬灭基团；

其中，荧光报告基团包括：FAM、ViC、NED、Cy3、Cy5、JOE、TEXASRED或TAMRA；

荧光淬灭基团包括：MGB或TAMRA。

4.一种用于检测BRAF基因第15号外显子突变V600E的探针，其特征在于，包括：包含SEQ ID NO.4所示序列的探针、包含SEQ ID NO.5所示序列的探针或包含SEQ ID NO.6所示序列的探针。

5.如权利要求4所述的探针，其特征在于：所述探针的两端还分别标记有荧光报告基团和荧光淬灭基团；

其中，荧光报告基团包括：FAM、ViC、NED、Cy3、Cy5、JOE、TEXASRED或TAMRA；

荧光淬灭基团包括：MGB或TAMRA。

6.一种用于检测BRAF基因第15号外显子突变V600E的PNA阻遏序列，其特征在于，包括：SEQ ID NO.7所示的PNA阻遏序列或SEQ ID NO.8所示的PNA阻遏序列；

SEQ ID NO.7：TTGGTCTAGCTACANBNAAATC；其中，N表示A、C、G或T，B表示C、G或T；

SEQ ID NO.8：TTGGTCTAGCTACAHNNAAATC；其中，H表示A、C或T，N表示A、C、G或T。

7.如权利要求6所述的PNA阻遏序列，其特征在于：所述SEQ ID NO.7中的NBN选自以下组合：

ACA、ACT、ACC、ACG、AGA、AGT、AGC、AGG、ATA、ATT、ATC、ATG、TCA、TCT、TCC、TCG、TGA、TGT、TGC、TGG、TTA、TTT、TTC、TTG、GCA、GCT、GCC、GCG、GGA、GGT、GGC、GGG、GTA、GTT、GTC、GTG、CCA、CCT、CCC、CCG、CGA、CGT、CGC、CGG、CTA、CTT、CTC或者CTG；

SEQ ID NO.8中的HNN选自以下组合：

AAA、AAT、AAC、AAG、ATA、ATT、ATC、ATG、AGA、AGT、AGC、AGG、ACA、ACT、ACC、ACG、CAA、CAT、CAC、CAG、CTA、CTT、CTC、CTG、CGA、CGT、CGC、CGG、CCA、CCT、CCC、CCG、TAA、TAT、TAC、TAG、TTA、TTT、TTC、TTG、TGA、TGT、TGC、TGG、TCA、TCT、TCC或者TCG。

8.如权利要求6所述的PNA阻遏序列，其特征在于：所述用于检测BRAF基因第15号外显子突变V600E的PNA阻遏序列，包括：SEQ ID NO.7所示的PNA阻遏序列和SEQ ID NO.8所示的PNA阻遏序列；

其中，SEQ ID NO.7中的NBN包括：GTG、ATG和AGG；

SEQ ID NO.8中的HNN包括：AAG、ATG和AGG。

9.如权利要求6所述的PNA阻遏序列，其特征在于：所述用于检测BRAF基因第15号外显子突变V600E的PNA阻遏序列，包括：如SEQ ID NO.12所示的PNA阻遏序列和如SEQ ID NO.15所示的PNA阻遏序列。

10.一种用于检测BRAF基因第15号外显子突变V600K的探针，其特征在于，包括：包含SEQ ID NO.9所示序列的探针。

11.如权利要求10所述的探针，其特征在于：所述探针的两端还分别标记有荧光报告基团和荧光淬灭基团；

其中，荧光报告基团包括：FAM、ViC、NED、Cy3、Cy5、JOE、TEXASRED或TAMRA；

荧光淬灭基团包括：MGB或TAMRA。