[发明专利]一种双中性蛋白酶分步酶解热榨花生粕制备花生肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及花生粕利用领域，尤其涉及一种双中性蛋白酶分步酶解热榨花生粕制备花生肽的方法。

背景技术

花生是我国重要的油料作物，产量和出口量高居世界首位。花生蛋白含有人体必需的八种氨基酸，精氨酸含量高于其它坚果，生物学效价高于大豆。

花生粕是花生榨油过程中产生的副产物，年产量约达300万吨，根据提油工艺的不同，花生粕又分为热榨花生粕、溶剂浸提花生粕和冷榨花生粕。目前，我国花生榨油主要采用热榨的方式，热榨花生粕中花生蛋白含量为45％～55％，但是热榨花生粕中花生蛋白变性程度严重，影响其功能及生理活性，从中直接提取花生蛋白得率非常低，所以目前对热榨花生粕的利用受到了很大的限制，仅有不足1％用于食品工业，大多用作动物饲料，产品附加值低，资源浪费严重，进一步开发和利用这一巨大的潜在蛋白资源，生产高附加值产品成了当务之急。

多项研究表明，花生蛋白经蛋白酶水解制备成花生肽后具有多种生理活性，包括抗氧化作用、抗菌作用、降血压作用等。因此，研究热榨花生粕酶解工艺制备花生肽，可以开发和利用热榨花生粕这一巨大的潜在蛋白资源，生产高附加值蛋白产品。采用生物酶法在温和条件下对蛋白进行水解，生成的多肽具有很高营养价值。现代营养研究表明，分子量小于1000U的短肽极易被人体吸收利用，而且具有较强的功能活性，这就要求所选用的酶解工艺在保证短肽得率的前提下尽量提高蛋白的水解度。

目前，关于花生肽的提取方法中普遍使用了大量碱处理或者一些有害的化学溶剂，不可避免地存在威胁人体健康的隐患。现有的生物酶处理方法中，普遍采用碱性蛋白酶对花生蛋白进行酶解，然后经过脱盐等多个繁琐的步骤，制备花生肽，酶解时间一般较长，普遍为360～960min，短肽得率及水解度较低，短肽得率在60％～65％左右，水解度在12％～16％左右，因此，如何简化工艺并在短时间获得高水解度、高得率的花生肽成为生产工艺中需要解决的一大难题。

发明内容

本发明的目的是提供一种双中性蛋白酶分步酶解热榨花生粕制备花生肽的方法，通过利用中性蛋白酶和由内切酶与外切酶组成的复合蛋白酶分步酶解热榨花生粕，并通过多项实验确定最佳酶解条件及所述中性蛋白酶和复合蛋白酶的加入量，提供了一种工艺简单、条件温和、制备时间短、制备成本低且短肽得率及水解度高的花生肽的制备方法，有效提高热榨花生粕的利用率。

本发明的技术方案为：

一种双中性蛋白酶分步酶解热榨花生粕制备花生肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、将热榨花生粕与蒸馏水混合，制备质量浓度为13～15％的热榨花生粕溶液，并测定所述热榨花生粕中花生蛋白的含量；

步骤二、调节并保持所述热榨花生粕溶液的温度为40～50℃，向所述热榨花生粕溶液中加入中性蛋白酶，进行酶解反应1.5～2.0h，得到第一酶解液，其中所述中性蛋白酶的加入量根据所述热榨花生粕溶液的质量浓度及所测定的热榨花生粕中花生蛋白的含量计算得到；

步骤三、向所述第一酶解液中加入复合蛋白酶，保持温度40～50℃，进行酶解反应2.0～3.0h，得到第二酶解液，其中所述复合蛋白酶的加入量根据所述热榨花生粕溶液的质量浓度及所测定的热榨花生粕中花生蛋白的含量计算得到；

步骤四、将所述第二酶解液中的所述中性蛋白酶和复合蛋白酶灭活，离心取上清液，得到花生肽溶液。

优选的是，所述的双中性蛋白酶分步酶解热榨花生粕制备花生肽的方法中，步骤二中所述中性蛋白酶的酶解反应时间为1.5h，温度为45℃。

优选的是，所述的双中性蛋白酶分步酶解热榨花生粕制备花生肽的方法中，步骤三中所述复合蛋白酶的酶解反应时间为2.5h，温度为45℃。

优选的是，所述的双中性蛋白酶分步酶解热榨花生粕制备花生肽的方法中，步骤二中所述中性蛋白酶的加入量为5200～6500U／g花生蛋白，步骤三中所述复合蛋白酶的加入量为249～499U／g花生蛋白。

优选的是，所述的双中性蛋白酶分步酶解热榨花生粕制备花生肽的方法中，步骤二中所述中性蛋白酶的加入量为5200U／g花生蛋白，步骤三中所述复合蛋白酶的加入量为374U／g花生蛋白。

优选的是，所述的双中性蛋白酶分步酶解热榨花生粕制备花生肽的方法中，所述热榨花生粕中花生蛋白的含量通过凯氏定氮法测定。

优选的是，所述的双中性蛋白酶分步酶解热榨花生粕制备花生肽的方法中，步骤一中所述热榨花生粕溶液的质量浓度为14％。