[发明专利]一种高灵敏度的胱抑素C测定试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医学检验领域，具体涉及一种纳米胶乳微粒型的胱抑素C测定试剂盒。 

背景技术

胱抑素C(Cystatin C)是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，分子量为13.3KD，由122个氨基酸残基组成，可由机体所有有核细胞产生，产生率恒定。循环中的胱抑素C仅经肾小球滤过而被清除，是一种反映肾小球滤过率变化的内源性标志物，并在近曲小管重吸收，但重吸收后被完全代谢分解，不返回血液。因此，血中浓度由肾小球滤过率决定，而不依赖任何外来因素，如性别、年龄、饮食的影响，是一种反映肾小球滤过率变化的理想同源性标志物。传统习惯中一般把尿素氮、肌酐作为常规肾功能的检测项目，但因肾脏有强大的储备能力和代偿能力，在肾小球受损早期或轻度受损时，血中尿素氮、肌酐仍可维持在正常水平，只有在严重肾小球损害，一般肾小球滤过率降低50％以下时，血清尿素氮、肌酐浓度才明显升高。因此，胱抑素C是迄今为止能基本满足肾小球滤过率的理想内源性标志物，是较血清尿素氮、肌酐具有更高敏感性和特异性的检测指标，对于评价肾小球滤过率有非常重要的价值。 

检测血清胱抑素C的方法主要采用免疫学方法，以酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)、放射免疫测定法(radioimmunoassay，RIA)和颗粒增强透射免疫比浊法(particle-enhanced turbidimetric immunoassay，PETIA)这几种方法为主。ELISA方法虽然在临床上使用了近二十年，但它依然存在一些致命缺点，定量准确性差、操作时间长、自动化程度低，一般只能用于定性检测。RIA灵敏度高，但不稳定，重复性比ELISA差，而且存在放射性污染的危险。PETIA是近年来出现的一种较为稳定、快速、准确测定胱抑素C血清浓度的检测方法。PETIA的基本原理是在高分子胶乳微粒的表面交联单克隆抗体，当交联有抗体的微粒与抗原结合后，在短时间内会迅速聚集在一起，改变了反应液的透光性能。而且，反应液透光性能(即吸光度)的改变与被测抗原的浓度有较强的相关性，即胶乳颗粒凝集越多，越会阻碍光线的透光性，反应液的吸光度就越大，在一定范围内与被测抗原的浓度成正比。PETIA检测方法反应时间短，精密度好，检测范围宽，黄疸、溶血和脂血标本均不受影响，易于自动化，是目前使用非常广泛的一种检测方法，但该方法的检测灵敏度还有待进一步提高。 

目前，PETIA检测试剂所采用的胶乳颗粒多为惰性微粒、羧基化微粒及氨基化微粒。表面修饰的胶乳粒子与抗体的结合是通过其表面的羧基或氨基与抗体的氨基端共价结合，在微粒与抗体之间有一个桥联化学臂，降低了位阻效应，不仅提高了抗体的结合率，而且还为抗体提供合适的三维空间立体结构，有效地保护了抗体与抗原结合的活性区域。国内外已有多家公司提供纳米级表面修饰的微粒粒子原料，并广泛应用于PETIA。这些厂家提供的粒 子直径在20nm～4μm，可以作为多克隆抗体和单克隆抗体的载体。纳米级粒子的推出解决了对单克隆抗体结合的能力不强，临床检测的线性范围窄，灵敏度低，干扰因素多，实验稳定性差等问题，大大促进了免疫比浊法在临床上的广泛应用。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是进一步提高检测血清中胱抑素C含量的分析灵敏度；提供一种特异性好，灵敏度高，精密度好，准确度高的纳米胶乳微粒型胱抑素C测定试剂盒。 

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：一种纳米胶乳微粒型胱抑素C测定试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，其中试剂R1和试剂R2的体积比为4.5∶1。所述试剂R1为促进抗体抗原特异性结合的反应液，组分包括：10～30mmol/L的缓冲液、0.01％～4％(w/v)的增乳剂、0.5％～2％(w/v)的稳定剂、0.1％(w/v)的防腐剂；所述试剂R2为结合有抗人胱抑素C抗体纳米胶乳微粒的缓冲液，组分包括：0.1％～0.5％(w/v)标记有抗人胱抑素C抗体的纳米胶乳微粒、0.2％～2％(w/v)的稳定剂、10～30mmol/L的缓冲液、0.1％(w/v)的防腐剂。 

所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、2-吗啉乙横酸(NES)缓冲溶液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)缓冲液和三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液中的一种或多种；所述缓冲液pH值为6～9。所述缓冲液可以为其他具有相似特征的缓冲液。