[发明专利]一种基于恒温技术检测结核分枝杆菌复合群的方法和检测试剂盒有效
| 申请号： | 201410105419.3 | 申请日： | 2014-03-20 |
| 公开（公告）号： | CN103898215A | 公开（公告）日： | 2014-07-02 |
| 发明（设计）人： | 石磊;曹炜伟;庄阳阳;刘美贤;唐大运;李红梅;张璜 | 申请（专利权）人： | 广州迪澳生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/32 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 郑莹 |
| 地址： | 510663 广东省广州市高新技术产业开*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 恒温 技术 检测 结核 分枝杆菌 复合 方法 试剂盒 | ||
1.一种结核分枝杆菌复合群的快速检测方法，包括以下步骤：
1）根据结核分枝杆菌的GyrB基因设计5条SmartAmp恒温扩增引物；
2）加入待检样品DNA，在上述引物及DNA 聚合酶的作用下进行恒温扩增反应；
3）根据扩增结果判断待检样品是否为结核分枝杆菌复合群。
2.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于，步骤1）所述SmartAmp恒温扩增引物的序列如下所示：
TP：GCCTTCCCGGATATCGTCACGGTGAACAAGTACGCCAA；
FP：TTTATATATATATAAACGATTTGACCTCGGTGTT；
BP：GCCAGACCAAGACCAAGTT；
OP1：CTTCGCCAACACCATCAA；
OP2： GCTGTTCGTTACAGACCTT。
3.根据权利要求1或2所述的快速检测方法，其特征在于，步骤2）所述恒温扩增反应的体系为：25μL反应体系中含有TP和EP引物各1.6μmol/L、BP引物0.8 μmol/L、OP1和OP2引物各0.5 μmol/L、dNTP 0.5 mmol/L、甜菜碱0.6mol/L、（NH4）2SO4 10 mmol/L、MgCl2 2.5 mmol/L、KCl 10 mmol/L、MgSO4 2 mmol/L、STYO-9 5 μmol/L、pH为8.8的Tris-HCl 20 mmol/L、0.1% Triton X-100、6U Bst DNA酶，1μg Tap Muts、1μL DNA 模板。
4.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于，步骤2）所述的恒温扩增反应的程序为：60～65℃反应20～40 min。
5.一种基于恒温技术检测结核分枝杆菌复合群的试剂盒，其含有根据结核分枝杆菌的GyrB基因设计的5条SmartAmp恒温扩增引物。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述SmartAmp恒温扩增引物的序列如下所示：
TP：GCCTTCCCGGATATCGTCACGGTGAACAAGTACGCCAA；
FP：TTTATATATATATAAACGATTTGACCTCGGTGTT；
BP：GCCAGACCAAGACCAAGTT；
OP1：CTTCGCCAACACCATCAA；
OP2： GCTGTTCGTTACAGACCTT。
7.根据权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括恒温扩增反应液、SYTO-9、Tris-HCl、Triton X-100、Bst DNA聚合酶， 错配结合蛋白Tap Muts。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述扩增反应液中含有：dNTP、甜菜碱、（NH4）2SO4、MgCl2、KCl 和MgSO4 。
9.一组用于结核分枝杆菌复合群的快速检测的SmartAmp恒温扩增引物，其序列如下所示：
TP：GCCTTCCCGGATATCGTCACGGTGAACAAGTACGCCAA；
FP：TTTATATATATATAAACGATTTGACCTCGGTGTT；
BP：GCCAGACCAAGACCAAGTT；
OP1：CTTCGCCAACACCATCAA；
OP2：GCTGTTCGTTACAGACCTT。
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