[发明专利]一种亲和层析柱的清洗方法

说明书

本发明涉及一种亲和层析柱的清洗方法，包括如下步骤：步骤1，将不洁的亲和层析柱填料，用水清洗，再用盐酸胍清洗；步骤2，用水清洗，再用氢氧化钠水溶液清洗；步骤3，用平衡缓冲液(pH5.0‑8)清洗；根据需要，本发明还包括步骤4和步骤5的步骤，如下：步骤4，取步骤3得到的清洗液，滴磷酸，观察有无沉淀产生，如无沉淀，用总有机碳分析仪测定该清洗液，测定结果低于500ppm，则表示清洗合格；步骤5，取步骤4得到的清洗液，滴磷酸，观察有无沉淀产生，如无沉淀，用总有机碳分析仪测定该清洗液，测定结果低于500ppm，则表示清洗合格；步骤6，若有沉淀产生，须用水将步骤4得到清洗液稀释直至滴加磷酸后无沉淀出现后，将稀释后的清洗液用总有机碳分析仪测定该清洗液，测定结果乘以稀释倍数获得的数据低于500ppm，则表示清洗合格。

技术领域

本发明涉及层析柱的清洗方法，特别涉及一种亲和层析柱的清洗方法。

背景技术

亲和层析法是蛋白分离的一种技术，可将含有特殊结构的蛋白质吸附在层析柱上，以达到蛋白纯化的目的。在生物制药领域，亲和层析法被广泛应用。亲和层析柱使用后，可能会对下次使用造成污染，引入外来污染物，比如会对下一次使用引入内毒素或者将上一次没有清洗干净的蛋白引入到下次产物中。现有亲和层析柱的清洗方法无固定的技术方案，故对清洗效果无法保障。为保证每次使用后的亲和层析柱的清洗干净，不会对下一次使用造成污染，需要建立规范的亲和层析的清洗流程。

现有清洗方法主要用水浸泡冲洗，或用缓冲溶液，酸，碱等溶液进行浸泡冲洗，但因没有适当的检测方法对清洗过的填料进行检测，对清洗效果无法保障。

本发明是研究一种亲和层析柱(填料为对氨基苯甲醚)的清洗方法。

本发明经过研究，找到一种简单易行，适合工业化的清洗方法，即通过五步清洗法，并经过总有机碳分析仪测定清洗合格。通过本发明的方法对亲和层析柱进行清洗，使得亲和层析柱清洗效果得到了保障，去除了亲和层析柱内的内毒素，微生物以及上一次使用残留的蛋白，确保了总有机碳检验合格。

发明内容

本发明提供了一种亲和层析柱的清洗方法，所述清洗是指对使用过或将要使用的不洁填料进行清洗，清洗合格后进行下一次的柱层析。

本发明所述亲和层析柱，其填料为任何一种具有亲和层析柱功能的填料，选自：GE医疗集团的Benzamidine Sepharose4FF H-SUB。

优选：对氨基苯甲醚，明胶（Gelatin）.最优选的为对氨基苯甲醚。

上述填料均可以通过现有技术制备，也可通过购买得到。

本发明提供一种亲和层析柱的清洗方法，包括如下步骤：

步骤1，

将不洁的亲和层析柱填料，用水清洗，再用盐酸胍清洗；

步骤2，

用水清洗，再用氢氧化钠水溶液清洗

步骤3，

用平衡缓冲液(pH5.0-8)清洗。

根据需要，本发明还包括步骤4和步骤5的步骤，如下：

步骤4，

取步骤3得到的清洗液，滴磷酸，观察有无沉淀产生，如无沉淀，用总有机碳分析仪测定该清洗液，测定结果低于500ppm，则表示清洗合格。

步骤5，

若有沉淀产生，须用水将步骤4得到清洗液稀释直至滴加磷酸后无沉淀出现

后，将稀释后的清洗液用总有机碳分析仪测定该清洗液，测定结果乘以稀释

倍数获得的数据低于500ppm，则表示清洗合格。