[发明专利]一种检测环境中多环芳烃化学物的质粒及应用

权利要求书

1.一种质粒，其特征在于用人源性AHR基因启动子连接内参内置型双荧光素酶报告基因的慢病毒载体，构建AHR过表达的重组慢病毒质粒。

2.根据权利要求1所述的一种质粒，其特征在于所述的人源性AHR基因的启动子序列见SEQ ID NO:1。

3.根据权利要求2所述的一种质粒，其特征在于所述的AHR基因的启动子，获取该启动子使用的引物序列为： TGGTTAATTAAGGCACTACACTATACTGTATTC，见SEQ ID NO:2；CGGGCTAGCAACAGAGCGTCGACGGGACTC，见SEQ ID NO:3。

4.根据权利要求1所述的质粒，其特征在于所使用的内参内置型双荧光素酶报告基因的慢病毒载体为CV060，元件的顺序为MCS-firefly-Luc-Tk-Renilla-Luc，包含PacI/和NheI双酶切位点。

5.利用权利要求1所述的质粒检测环境中多环芳烃化学物的方法，其特征在于利用所述的重组质粒经慢病毒包装后，转染人293T细胞株，感染复数MOI为2，转染8 - 12小时，换新鲜的完全培养基，继续培养3 - 4天，利用多环芳烃类物质刺激转染后的293T细胞，通过检测双荧光素酶报告基因活性的比值来检测样本中多环芳烃类物质的存在。

6.根据权利要求5所述的检测环境中多环芳烃化学物的方法，其特征在于检测时间是在多环芳烃类物质刺激转染后的人293T细胞之后的24小时。

7.根据权利要求5所述的检测环境中多环芳烃化学物的方法，其特征在于：在多环芳烃诱导物刺激转染后的人293T细胞后，检测双荧光素酶报告基因的活性，根据双荧光素酶报告基因活性的比值大小，对照标准曲线可计算其含量。