[发明专利]一种同时检测人体尿液中多种有机酸含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生化检测技术领域，具体涉及一种同时检测人体尿液中多种有机酸含量的方法。

背景技术

通过有机酸系列检测了解身体代谢状况，与检测汽车排出的废气，来推断发动机状况是类似原理。身体将碳水化合物、氨基酸、脂肪从营养物变为可吸收物质和废物的过程，称之“代谢途径”。在这个过程的各阶段中，需要不同的氨基酸、维生素、矿物质等元素构成的酶、辅酶来调节代谢速率，再加上消化系统的分工合作。代谢途径中，若是某单项或数项元素或缺或少了，生化反应就会被中断或减慢，中间代谢的酸性产物将被排入尿液里，生化学家称之为“有机酸”，可被功能医学检查所侦测出来。因此，尿有机酸检测可以了解碳水化合物、氨基酸、脂肪等三大营养代谢和摄取的状况、以及细胞产生能量的效率、神经传导物质的平衡、身体对维生素和矿物质的需求、解毒的能力、还有肠道菌群生态。

许多的慢性病诊断非常困难，尤其当它牵涉到非特异性的症状例如疲倦、思路混沌、肌肉酸痛、肠胃不适、关节疼痛、睡眠质量不佳等。一般标准的医学检验是用来判断疾病的状态，而全套代谢功能分析不是用来诊断疾病，而是用来帮助我们找出致病的原因。此分析帮助我们评估特定的代谢异常，然后我们能根据结果量身订做个人化的营养补充计划，针对需要帮忙的环节使身体恢复正常的功能。此分析的目的不仅仅限于症状的治疗，而是希望能在疾病发生前就找出营养或代谢的缺陷并加以矫正。

发明内容

本发明的目的是提供一种同时检测人体尿液中多种有机酸含量的方法，通过该方法能够同时检测人体尿液中可能出现的72种有机酸，该方法简单，操作方便，且准确度和灵敏度高。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现：

一种同时检测人体尿液中多种有机酸含量的方法，所述方法是采用气质联用技术进行检测，检测的方法具体包括以下步骤：①标本采集：收集晨尿或任意时间段尿液(该尿液为无防腐剂的尿液，若不及时使用该尿液，则将进行保存，优选在冷冻或冷藏的条件下保存在-20℃下)；②A.取一定量的步骤①所述的尿液，并加入0.4mg/mL的内标溶液；B.加入0.5mg/mL盐酸羟胺溶液和10mol/L氢氧化钠(NaOH)溶液，对尿样中的有机酸进行肟化反应，用旋涡仪充分涡旋混匀静置1h；C.加12mol/L浓盐酸，再加入乙酸乙酯和乙醚充分混匀后，离心5min，再次用旋涡仪充分涡旋混匀；吸取上层有机相放入干净离心管；用99.999％氮气吹干；D.加入衍生化试剂，放入吹氮仪底座或温箱，条件温度65℃，衍生化30min，所述衍生化试剂包括BSTFA(双三甲基硅三氟乙酰胺)和TMCS(三甲基氯硅烷)，BSTFA和TMCS的比例为97～99.5∶0.5～3，优选为99∶1(BSTFA∶TMCS＝99∶1，即为Sylon-BFT)，化合物被衍生化试剂BSTFA∶TMCS＝99∶1(Sylon-BFT)转化为三甲基硅(TMS)衍生物；E.进样，利用气质联用仪进行分析。

进一步地，步骤A中所述的尿液为含有0.2mg肌酐的尿液。

进一步地，步骤A中所述的内标溶液的加入量为20μL，该内标溶液是将内标物溶于去离子水中进行制备；所述的内标物优选为2-苯基丁酸(2-PA)。

进一步地，步骤B中所述的盐酸羟胺溶液的加入量为100μL，该盐酸羟胺溶液为盐酸羟胺的水溶液。步骤B中所述10mol/L氢氧化钠(NaOH)溶液的加入量为300μL，该氢氧化钠溶液为氢氧化钠的水溶液。

进一步地，步骤C中所述的浓盐酸的加入量为300μL，所述乙酸乙酯和乙醚的加入量均为2mL。

进一步地，步骤D中所述的衍生化试剂的加入量为100μL。所述的BSTFA和TMCS的比例为99∶1(BSTFA∶TMCS＝99∶1，即为Sylon-BFT)。

进一步地，步骤E中：所用气质联用仪的具体参数：毛细管色谱柱(HP-5MS)长30m，膜厚0.25μm，柱温箱起始温度70℃，3min，以10℃/min升温至260℃，然后再以20℃/min升温至280℃，2min，进样口温度250℃；氦气(99.999％)总流速23.4mL/min，分流比20∶1；离子源温度280℃，扫描范围50～550m/z(质荷比)。