[发明专利]一种磷酸化蛋白质组样品快速处理方法

权利要求书

1.一种磷酸化蛋白质组样品快速处理方法，其特征在于：

具体步骤如下：

（1）将数量为10 000-500 000个的 HeLa细胞样品加入50-100 μL反应体系内；

（2）将上述步骤（1）得到的反应体系加入胰蛋白酶后在振荡器上涡旋震荡至全部细胞膜破碎，所述反应体系中的胰蛋白酶的浓度为250 ng/µL-1.0 µg/µL；

（3）将上述步骤（2）中得到的混合物溶液放置于30-40 ℃水浴超声器内超声孵育；超声孵育反应时间为25 min-1 h；

（4）将上述步骤（3）中超声孵育后的混合液在通过离心机控制的、且填充了800 µg-2 mg 固定化金属钛离子亲和色谱材料的GELoader Tip枪头内进行磷酸肽富集，将所得磷酸化肽段放入冻干机冻干；得处理后的磷酸化蛋白质组样品。

2.根据权利要求1所述的磷酸化蛋白质组样品快速处理方法，其特征在于：将上述步骤（4）中得到的磷酸化肽段复溶在100 μL 0.1%体积浓度的甲酸中进行RP LC-MS/MS分析。

3.根据权利要求1所述的磷酸化蛋白质组样品快速处理方法，其特征在于：步骤（1）中所述的反应体系是细胞裂解-蛋白酶解的反应体系，细胞裂解-蛋白酶解的反应体系是含有0.5%-1.0% 体积分数乙基苯基聚乙二醇，5-10 mM 二硫苏糖醇和磷酸酶抑制剂的50-100 mM Tris-HCl缓冲溶液。

4.根据权利要求3所述的磷酸化蛋白质组样品快速处理方法，其特征在于：所述反应体系中的磷酸酶抑制剂组成为0.5-1.5 mM 氟化钠和0.5-1.5 mM 正钒酸钠，pH为7.8-8.5。

5.根据权利要求1所述的磷酸化蛋白质组样品快速处理方法，其特征在于：步骤（4）离心机的离心力为1000 g-3000 g，所述冻干机设置温度为室温。

6.根据权利要求1所述的磷酸化蛋白质组样品快速处理方法，其特征在于：所采用的富集方式是将Ti-IMAC富集材料填充至GELoader Tip枪头内，借用1000 g-3000 g离心力进行富集。

7.根据权利要求1所述的磷酸化蛋白质组样品快速处理方法，其特征在于：将该样品处理方法应用于磷酸化蛋白质组学快速分析，可获取相应的磷酸肽和磷酸化位点的鉴定结果，该结果可以用于翻译后修饰蛋白质组学分析。