[发明专利]一种检测抗生素残留的适配体传感器的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测抗生素残留的适配体传感器的制备方法，属于农产品安全检测技术领域。

技术背景

抗生素作为一种治疗疾病的药物，目前已经被广泛应用在乳牛的疾病治疗。无论是通过肌肉注射还是口服，进入奶牛体内的抗生素都是可以通过乳牛的新陈代谢排出体外，并且牛乳就是乳牛把抗生素类物质排泄出体外的一种重要途径。因此牛奶中的抗生素残留的问题，一般专家调查认为，泌乳期乳牛的用药不当和安全时间不注意是牛奶中的抗生素残留的重要的两个来源，特别是使用乳房灌注法治疗乳腺炎时，易造成牛乳中抗生素残留。牛奶是老少皆宜的营养品，牛奶中若含有抗生素，对长期饮用者来说无疑是等于长期服用小剂量的抗生素，对抗生素过敏的人服用残留抗生素的乳后会发生过敏反应。即使是正常饮用者，体内的某些条件性致病菌易产生耐药性，一旦患病再用同种抗生素治疗很难奏效。为了预防和解决抗生素残留造成的食品污染和人体安全等问题,现在最有效的策略就是尽早尽快地找到高效、灵敏、准确的检测残留卡那霉素方法。目前我国已经加入WTO，这就使得我们与世界各国的贸易往来变得现实并且严肃，这就要求我们更加注重卡那霉素残留的检测以及预防。

抗生素残留的检测方法多种多样，每种方法都有各自特点，适应在不同条件下检测。在选用各种方法时我们应当根据简便易用、精确可靠的原则。常用的抗生素残留检测方法有气相色谱法（GC）、光谱法、高效液相色谱法（HPLC）、薄层色谱法（TLC）、适配体分析法等。这些分析方法虽然具有高选择性，但是由于操作繁琐、耗时长、成本高，并且需对样品进行预浓缩和衍生处理，所以很难得到广泛应用。因此，人们会更加急切的需要快速、可靠、经济和适合于现场应用的快速检测方法。于是,快速、可信、廉价、敏感的适配体生物传感器应运而生。与传统的分析方法相比,适配体生物传感器具有待测的样品不用经过预先处理、分析速度快、操作系统简单、准确度高、专一性强、成本低、响应快等优点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能克服上述缺陷以及操作简单、灵敏度高、选择性好的检测抗生素残留的电流型适配体传感器的制备方法。采用的技术方案为：

一种检测抗生素残留的适配体传感器的制备方法，是将金电极(d=2mm)与硫堇进行电聚合，获得电聚合硫堇电极，再将预配好的碳纳米管-石墨烯纳米复合物均匀滴涂到电聚合硫堇电极表面，晾干后，再将电极浸入到抗生素适配体溶液中，冲洗晾干后，再用BSA溶液封闭，获得抗生素适配体传感器。

所述方法的步骤如下：

1）  制备碳纳米管-石墨烯纳米溶液；

2）  清洗，活化并测试金电极；

3）  将步骤2）所得金电极进行电聚合硫堇，获得电聚合硫堇电极；

4）  在步骤3）所得电聚合硫堇电极上均匀滴涂步骤1）制备的碳纳米管-石墨烯纳米溶液，获得纳米涂膜电极；

5）  将步骤4）所得纳米涂膜电极浸入到抗生素适配体溶液中，冲洗晾干后获得适配体电极；

6）  利用BSA溶液封闭步骤5）所得适配体电极，晾干后获得适配体传感器。

所述方法的步骤1）所述制备碳纳米管-石墨烯纳米溶液，是取100mg碳纳米管加入到2.6mol/L的HNO₃中，在140℃下回流6h, 抽滤，用超纯水洗涤至中性，加入石墨烯后将溶液分散在N,N-二甲基甲酰胺中，再用超声波分散，直到得到黑色悬浊液。

所述方法的步骤2）所述清洗，活化并测试金电极，是利用热piranha溶液浸泡金电极后，再用Al₂O₃浆抛光，在依次用去离子水、HNO₃、无水乙醇和去离子水超声清洗，干燥后用循环伏安法活化，并通过检测金电极循环伏安曲线峰电位差测试金电极。

所述方法的步骤3）所述电聚合硫堇，是将预处理好的金电极放入含0.10mol/L的HNO₃和4mmol/L硫堇的磷酸盐缓冲液中，在-0.1~1.4V范围内，以50mV/s的速度循环扫描30圈，取出清洗。

所述方法的步骤4）所述滴涂碳纳米管-石墨烯纳米溶液，是取5μL碳纳米管-石墨烯纳米复合液滴涂在电聚合硫堇电极表面，20℃下静置2h，然后用pH7.5的磷酸盐缓冲液冲洗，氮气吹干。

所述方法的步骤5）所述浸入到抗生素适配体溶液中，浸泡时间为0.5h，浸泡温度为4℃。

所述方法的步骤6）所述用BSA溶液封闭电极，BSA溶液浓度为0.5%，封闭温度为20℃，封闭时间为2h。

所述方法的具体步骤如下：