[发明专利]一种提高半胱氨酸利用率生物合成谷胱甘肽的方法有效
申请号: | 201410116362.7 | 申请日: | 2014-03-27 |
公开(公告)号: | CN103849639A | 公开(公告)日: | 2014-06-11 |
发明(设计)人: | 许激扬;卞筱泓;刘荣;赵玉成;沃龙飞;张雪霞 | 申请(专利权)人: | 中国药科大学 |
主分类号: | C12N15/63 | 分类号: | C12N15/63;C12N15/66;C12N1/21;C12P21/02;C12R1/19 |
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地址: | 211198 江苏*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 提高 半胱氨酸 利用率 生物 合成 谷胱甘肽 方法 | ||
1.一种胱氨酸转运系统底物结合蛋白重组质粒,其特征在于,重组质粒由胱氨酸转运系统底物结合蛋白基因fliY序列和一段合适的载体片段连接而成,所述fliY序列如NCBI上Gene ID为948833的序列所示,载体片段为pET28a。
2.如权利要求1所述的重组质粒,其特征在于,所述fliY序列分别置于T7启动子、Lac操纵子之下。
3.如权利要求1所述的重组质粒,其特征在于,所述fliY序列为来源于E.coli K12的fliY基因。
4.如权利要求1或2所述的重组质粒,其特征在于,所述重组质粒还包括一段抗性基因片段---卡那霉素抗性基因。
5.如权利要求1-4中任一项所述的重组质粒的构建方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
A)PCR扩增获得fliY序列;
B)将fliY序列克隆到合适的表达载体。
6.如权利要求1-4中任一项所述的重组质粒用于转化合成谷胱甘肽的原始细菌株大肠杆菌E.coli BL21(DE3)的应用。
7.一种提高半胱氨酸利用率生物合成谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述方法为,将权利要求1-4中任一项所述的重组质粒转化合成谷胱甘肽原始细菌株大肠杆菌E.coli BL21(DE3),获得重组菌。
8.如权利要求6所述的方法,其特征在于,通过发酵培养所述重组菌,并在发酵培养一定时间后,用诱导剂乳糖诱导胱氨酸转运系统底物结合蛋白基因fliY的表达,提高半胱氨酸利用率,进一步提高谷胱甘肽的合成量。
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