[发明专利]鉴定鹿茸的PCR特异引物及其检测方法有效
申请号: | 201410119046.5 | 申请日: | 2014-03-28 |
公开(公告)号: | CN104946730B | 公开(公告)日: | 2020-06-19 |
发明(设计)人: | 黄璐琦;袁媛;蒋超;李曼 | 申请(专利权)人: | 中国中医科学院中药研究所 |
主分类号: | C12Q1/6888 | 分类号: | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅 |
地址: | 100700 北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 鉴定 鹿茸 pcr 特异 引物 及其 检测 方法 | ||
1.引物组,由鉴定马鹿的特异引物F1、F2和鉴定梅花鹿的特异引物F3、F4组成;
其中,所述特异引物F1、F2的序列为:
F1:5′-CTAGAGACATGAAACATCGGAGTGA-3′
F2:5′-GATGGATGAGACTAGGGCTAAGACT-3′;
所述特异引物F3、F4的序列为:
F3:5′-TCCTAGCAATACACTATACATCTGGC-3′
F4:5′-GATGGATGAGACTAGGGCTAAGACT-3′。
2.一种鹿茸的PCR鉴定方法,其特征在于,包括下列步骤:
a)从所述材料中提取得到DNA样品;
b)用权利要求1所述的引物F1、F2进行PCR反应,PCR反应参数为95℃预变性5min后,进行30次循环,循环参数为95℃30s,55-65℃45s,后延伸72℃5min,获得扩增产物1;
c)用权利要求1所述的引物F3、F4进行PCR反应,PCR反应参数为95℃预变性5min后,进行30次循环,循环参数为95℃30s,55-65℃45s,后延伸72℃5min,获得扩增产物2;
d)电泳所述扩增产物1,如果存在分子量582bp的单一DNA条带,则确定所检材料为马鹿;
e)电泳所述扩增产物2,如果存在分子量831bp的单一DNA条带,则确定所检材料为梅花鹿;
f)直接在所述扩增产物1或2中加入2μL20×SYBR Green I染料,振荡30s充分混匀,于365nm紫外灯下检测PCR产物;如果反应产物发出强烈绿色荧光,则确定所检材料为马鹿或梅花鹿。
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