[发明专利]鉴定鹿茸的PCR特异引物及其检测方法有效

专利信息
申请号: 201410119046.5 申请日: 2014-03-28
公开(公告)号: CN104946730B 公开(公告)日: 2020-06-19
发明(设计)人: 黄璐琦;袁媛;蒋超;李曼 申请(专利权)人: 中国中医科学院中药研究所
主分类号: C12Q1/6888 分类号: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
代理公司: 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 代理人: 关畅
地址: 100700 北*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 鉴定 鹿茸 pcr 特异 引物 及其 检测 方法
【权利要求书】:

1.引物组,由鉴定马鹿的特异引物F1、F2和鉴定梅花鹿的特异引物F3、F4组成;

其中,所述特异引物F1、F2的序列为:

F1:5′-CTAGAGACATGAAACATCGGAGTGA-3′

F2:5′-GATGGATGAGACTAGGGCTAAGACT-3′;

所述特异引物F3、F4的序列为:

F3:5′-TCCTAGCAATACACTATACATCTGGC-3′

F4:5′-GATGGATGAGACTAGGGCTAAGACT-3′。

2.一种鹿茸的PCR鉴定方法,其特征在于,包括下列步骤:

a)从所述材料中提取得到DNA样品;

b)用权利要求1所述的引物F1、F2进行PCR反应,PCR反应参数为95℃预变性5min后,进行30次循环,循环参数为95℃30s,55-65℃45s,后延伸72℃5min,获得扩增产物1;

c)用权利要求1所述的引物F3、F4进行PCR反应,PCR反应参数为95℃预变性5min后,进行30次循环,循环参数为95℃30s,55-65℃45s,后延伸72℃5min,获得扩增产物2;

d)电泳所述扩增产物1,如果存在分子量582bp的单一DNA条带,则确定所检材料为马鹿;

e)电泳所述扩增产物2,如果存在分子量831bp的单一DNA条带,则确定所检材料为梅花鹿;

f)直接在所述扩增产物1或2中加入2μL20×SYBR Green I染料,振荡30s充分混匀,于365nm紫外灯下检测PCR产物;如果反应产物发出强烈绿色荧光,则确定所检材料为马鹿或梅花鹿。

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