[发明专利]鉴定鹿茸的PCR特异引物及其检测方法

说明书

本发明属于中药及中药材鉴定技术领域，特别涉及到一种能够特异鉴定鹿茸的PCR特异引物及其检测方法。使用此方法鉴别鹿茸的真伪，只通过简单的DNA提取、PCR特异性扩增、荧光检测即可完成对样品真伪的鉴别。具有操作简单、特异性强、重复性好等优点。主要用于鹿茸药材、含有鹿茸的制剂以及鹿茸活体材料的快速鉴定。

技术领域

本发明涉及中药及中药材鉴定技术领域，特别涉及一种能够特异鉴定鹿茸的PCR特异引物及其检测方法。主要用于鹿茸药材、含有鹿茸的制剂以及鹿茸活体材料的快速鉴定。

背景技术

中药材鹿茸为鹿科动物梅花鹿Cervusnippon Temminck或马鹿CervuselaphusLinnaeus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角。前者习称“花鹿茸”，后者习称“马鹿茸”，具有壮肾阳，益精血，强筋骨，调冲任，托疮毒之功效。

鹿的种类众多，除了药用的马鹿和梅花鹿之外还有驯鹿、赤鹿等，在药材市场上由于利益驱使常出现以驯鹿等冒充正品鹿茸的情况，且由于马鹿与梅花鹿的价格存在显著差异，市场上也常出现两种鹿茸混淆销售的情况。传统鉴别鹿茸的方法包括性状鉴别、显微鉴别、薄层色谱法鉴别、光谱法鉴别、紫外光谱法鉴别等。但是传统的检测方法主要依赖于药材中的化学成分，而化学成分又易受品种及产地的影响。王学勇等使用1对特异性引物建立了鉴别正品鹿茸(包括梅花鹿和马鹿)和其他近源种鹿茸的位点特异性PCR方法(王学勇，刘春生，张蓉等，位点特异性PCR方法的建立及对近源种鹿茸药材的鉴别研究，中国中药杂志，2009，23：3013-3016)，但由于马鹿与梅花鹿的亲缘关系远于其与伪品，因此该方法对于PCR反应条件和退火温度准确性要求比较苛刻，不适宜大范围推广。陈颖等公开了一种用于马鹿茸真伪鉴别的引物及探针、试剂盒和方法(授权号：201010555564.3)，用于梅花鹿茸真伪鉴别的引物及探针、试剂盒和方法(授权号：201010555571.3)，所公开的方法是基于荧光PCR的方法，其成本较高。本发明主要结合常规PCR和荧光检测方法，在较短时间内快速鉴定马鹿和梅花鹿，成本低、适用性好。在本发明被公布之前，尚未有任何公开或报道过本专利申请中所提及的PCR引物及方法。

发明内容

本发明提供了一种鹿茸的PCR特异性引物及其检测方法，该方法操作简单、样品量少、能快速准确的鉴定鹿茸药材、粉末制剂以及活体材料，特别适用于鉴定因加工而导致DNA含量极少、形态破碎的中药真伪的鉴定。

1.一种鉴定马鹿的特异引物F1、F2，其序列为：

F1：5′-CTAGAGACATGAAACATCGGAGTGA-3′

F2：5′-GATGGATGAGACTAGGGCTAAGACT-3′。

2.一种鉴定梅花鹿的特异引物F3、F4，其序列为：

F3：5′-TCCTAGCAATACACTATACATCTGGC-3′

F4：5′-GATGGATGAGACTAGGGCTAAGACT-3′；

3.一种鹿茸的PCR鉴定方法，其特征在于，包括下列步骤：

a)从所述材料中提取得到DNA样品；

b)用权利要求1所述的引物进行PCR反应，PCR反应参数为95℃预变性5min后，进行30次循环，循环参数为95℃30s，55-65℃45s，后延伸72℃5min，获得扩增产物；

c)用权利要求2所述的引物进行PCR反应，PCR反应参数为95℃预变性5min后，进行30次循环，循环参数为95℃30s，55-65℃45s，后延伸72℃5min，获得扩增产物；

d)电泳所述扩增产物，如果存在分子量582bp的单一DNA条带，则确定所检材料为马鹿；