[发明专利]PEG-SA及其药物组合物

说明书

技术领域

本发明属于蛋白质（尤其是干扰素）技术领域，具体而言，本发明涉及聚乙二醇（PEG）化的干扰素衍生物（PEG-SA）及其药物组合物和制备方法。其中，该药物组合物能充分利用干扰素衍生物（IFN-SA）PEG化制备获得的多种产物，包括PEG-SA二聚体，简化了产物分离纯化过程和/或提高了产物分离纯化操作的宽容度，而且药效也不差于、甚至略高于由纯化的PEG-SA单体组成的药物。

背景技术

早在本世纪初，我们就研究开发了一种具有强抗病毒活性的人α干扰素衍生物，其被命名为IFN-SA，其氨基酸序列等情况可以参见中国专利第01102915.3号（《抗病毒活性的人α干扰素衍生物》，CN1281623C）。

为了降低干扰素自身的免疫原性并为了提高在体液中的半衰期，我们开发了IFN-SA的N末端α氨基上单PEG化的产物（即PEG-IFN-SA，本文中简称为PEG-SA）及其制备工艺，通过分子筛层析柱进行细致的分离纯化，去除了修饰2个PEG的IFN-SA等副产物，最终获得了在RP-HPLC上仅表现为单一吸收峰的PEG-SA，其以纯的单体形式存在，药效确切，无论是纯度上还是药效上都非常适合药物应用（可以参见中国专利申请第201010516710.1号（《重组集成干扰素变异体聚乙二醇偶联物的制备和应用》，CN102453089A））。

本领域属于西方医药技术领域，在西方医药的核心——还原论这一基本理论的指导下（目前中医药现代化也有许多开始接受西药化这种还原论的思路了，可以参见郭志军，等.天津中医药，2003，20（1）：55），本领域技术人员应该去进行该药物临床方面的研究，而对该药物本身结构和纯化的研究会在此止步，至少没有动机将纯的PEG-SA单体去混用其他未知功效的物质。

然而，我们跳出了西方医学的限制，根据自身令人意外的发现，即在纯的PEG-SA单体中加入少量PEG-SA二聚体，不但基本不影响药效，某些配比还能提高药效，由此开发新的PEG-SA及其药物组合物，其中包括PEG-SA二聚体，在基本不影响药效的前提下，更充分地利用了IFN-SA PEG化过程中产生的约10-15%的PEG-SA多聚体（大部分是二聚体，可以直接利用约一半），降低了IFN-SA的损耗，节约了成本，并且简化了产物分离纯化过程、提高了生产效率（如可用高浓度的IFN-SA溶液作为起始原料）和/或提高了产物分离纯化操作的宽容度。

另外，我们还开发了新的PEG-SA的制备方法，没有受现有技术优化的结果阻碍，使得产生的副产物与现有技术的不同，更易于利用，即尽管会产生较多新的PEG-SA多聚体（如，二聚体）副产物，但是利用还原条件即可恢复成单体加以回收，更重要的是，这样的少量PEG-SA多聚体（尤其是二聚体）也可以直接与PEG-SA单体配制（或一步收集）成上述药物组合物。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供新的IFN衍生物、其药物组合物、药物制剂及制备和应用等。

具体而言，在第一方面，本发明提供了PEG-IFN的制备方法，所述方法包括：

（1）摩尔比为1：3.5～4.5的IFN和PEG醛在pH5～6缓冲液中以硼氢化物催化反应，获得PEG-SA反应液；和

（2）用色谱柱纯化步骤（1）获得的PEG-IFN反应液，收集PEG-SA；

其特征在于，

（a）在步骤（1）中，IFN的浓度为8～12mg/ml，反应的温度为23-27℃，和反应的时间为43～53；

（b）任选在步骤（2）中，仅仅用一步体积排阻色谱柱来纯化；和

（c）任选在步骤（2）中，收集PEG-IFN单体和/或多聚体。

在本文中，“PEG”和聚乙二醇可以互换使用，在与活性反应基团连用的时候（如PEG醛），指的是活性反应基团（如醛）活化的PEG分子；在与蛋白质（如IFN）连用的时候（如PEG-IFN），指的是PEG化的蛋白质。目前，PEG和带有活性反应基团的PEG基本已经商品化。