[发明专利]一种用于玲珑节瓜杂交种子纯度鉴定的SSR引物及方法有效
| 申请号： | 201410119286.5 | 申请日： | 2014-03-27 |
| 公开（公告）号： | CN103993070A | 公开（公告）日： | 2014-08-20 |
| 发明（设计）人： | 何晓明;彭庆务;郭明鑫;谢大森;江彪;罗少波;黄智文;刘文睿;林毓娥;刘洪彪 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院蔬菜研究所;广东科农蔬菜种业有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州知友专利商标代理有限公司 44104 | 代理人： | 宣国华 |
| 地址： | 510640 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 玲珑 杂交 种子 纯度 鉴定 ssr 引物 方法 | ||
1.一种用于玲珑节瓜杂交种子纯度鉴定的SSR引物，其特征是：所述引物包括引物ChQSSR304的上游引物ChQSSR304-F和下游引物ChQSSR304-R，所述上游引物ChQSSR304-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物ChQSSR304-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.一种玲珑节瓜杂交种子纯度的鉴定方法，其特征是：含以下步骤：
(1)提取节瓜幼苗的基因组DNA；
(2)以节瓜基因组DNA为模板，使用权利要求1中的引物ChQSSR304进行PCR扩增；
(3)对扩增产物进行凝胶电泳；
(4)对电泳结果进行分析，只有同时具有亲本特异性条带的单株才为真正的杂交种，缺少其中的任意一条带记为假杂种，计算种子纯度，其中，引物ChQSSR304能产生185bp的父本特异性标记ChQSSR304185以及156bp的母本特异性标记ChQSSR304156。
3.根据权利要求2所述的玲珑节瓜杂交种子纯度的鉴定方法，其特征是：步骤(2)中PCR扩增时采用的反应体系为：基因组DNA10ng，10×PCR buffer(含Mg2+)2μL，2.5Mm dNTP：1.5μL，SSR引物ChQSSR3040.25mmol·L-1，Taq酶1U，ddH2O补足至20μL。
4.根据权利要求2所述的玲珑节瓜杂交种子纯度的鉴定方法，其特征是：步骤(2)中PCR扩增时扩增程序为：95℃预变性3min后，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环后，72℃终延伸7min，置于4℃保存。
5.根据权利要求2所述的玲珑节瓜杂交种子纯度的鉴定方法，其特征是：步骤(3)中凝胶电泳时采用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。
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