[发明专利]快速检测沙门氏菌的抗体试剂及检测方法无效
申请号: | 201410120962.0 | 申请日: | 2014-03-27 |
公开(公告)号: | CN103837684A | 公开(公告)日: | 2014-06-04 |
发明(设计)人: | 朱国强;张江英;董立伟;孟霞;朱春红;姚丰华;朱晓芳 | 申请(专利权)人: | 扬州大学 |
主分类号: | G01N33/577 | 分类号: | G01N33/577;G01N33/569 |
代理公司: | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人: | 卢亚丽 |
地址: | 225009 *** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 快速 检测 沙门氏菌 抗体 试剂 方法 | ||
1.一种快速检测沙门氏菌的方法,用抗体试剂对待测样本进行玻板凝集试验检测;其特征在于所述抗体试剂通过下述方法制得:扩增沙门氏菌鞭毛蛋白编码基因fliC并将其插入表达载体pET-22b(+),随后将获得的重组质粒载体导入工程菌E.coli BL21(DE3),进而筛选重组阳性克隆;诱导并纯化重组表达蛋白;制备免疫原并免疫BALB/c小鼠,建立杂交瘤细胞株、筛选阳性细胞株、制备单抗腹水作为检测用抗体试剂。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于所述玻板凝集试验的步骤是:取表面洁净普通玻板若干块,同时用灭菌生理盐水将抗体试剂稀释至规定浓度;以移液器吸取一滴约10ul工作浓度的抗体试剂垂直滴于水平放置的玻板表面上;随后迅速滴加等量的待检培养菌液;用灭菌金属环或牙签使抗体试剂与待测菌液充分混合均匀,涂布成直径1-2cm的片状后随即平稳摇动玻板,在2min内观察试验结果;标准判定状况为室温下2min内,以抗体试剂是否与待检菌液产生絮状或颗粒状肉眼可见沉淀将反应结果判定为阳性或阴性。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于所述杂交瘤细胞株是3E2。
4.用于权利要求1所述检测方法的抗体试剂,其特征在于,是由杂交瘤细胞株3E2制备的单抗腹水。
5.杂交瘤细胞株3E2,其保藏编号是CGMCC NO.8955。
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