[发明专利]蛋白酶3抗体(PR3-Ab)定量测定试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种蛋白酶3抗体(PR3-Ab)定量测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括磁分离试剂、酶标记试剂、校准品、清洗浓缩液、底物溶液以及稳定剂。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磁分离试剂的制备步骤如下：

一、配制磁微粒缓冲液，以配制1L为例： 

1）、量取800mL纯化水于容器中，称取Tris 12.1g和NaCl 8.5g加入容器中，充分搅拌至完全溶解； 

2）、称取BSA 5g，量取新生牛血清50mL，Proclin300 0.2m至容器中，充分搅拌至完全溶解； 

3）、调pH，控制在pH在7.9-8.1之间； 

4）、最后用纯化水定容至1L，用0.2um滤器过滤，2-8℃保存待用；

二、制备磁分离试剂：

1）、取100mg含羧基（COOH）活性基团的磁微粒，用0.025mol/L，pH4.5-5 MES缓冲液10mL混悬；

2）、加入0.5-1mL浓度为10mg/mL的EDC水溶液，室温混悬30-60min；

3）、磁分离，去上清，用0.025mol/L，pH4.5-5 MES缓冲液10mL重悬；

4）、加入0.02-0.1mg的PR3抗原，室温混悬120-240min；

5）、磁分离，去上清，用磁微粒缓冲液重悬到1mg/mL，完成磁分离试剂的制备。

3.如权利要求1-2任其一所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标记试剂的制备步骤如下：

一、配制酶标记试剂稀释液，以配制1L为例：

1）、量取800mL纯化水于容器中，称取Hepes 6.06g、NaCl 8.5g加入容器中，充分搅拌至完全溶解； 

2）、称取BSA 5g，Zncl₂ 0.1g、Proclin-300 0.2mL和MgCl₂ 0.1g于容器中中，充分搅拌至完全溶解； 

3）、调pH，控制pH在7.5-8.0之间； 

4）、最后用纯化水定容至1L，2-8℃保存待用；

二、碱性磷酸酶（ALP）与PR3抗体的偶联

1）、取1mg PR3抗体，加入10mg/mL的偶联剂2-IT溶液2-4μL，室温静置20min，加入0.1moL/L的甘氨酸溶液10μL，室温静置5min；用G-25凝胶柱除盐，收集活化后的PR3抗体，2-8℃保存备用；

2）、取1.5mg的ALP，加入5mg/mL的SMCC溶液10-20μL，室温静置30min，用G-25凝胶柱除盐，收集活化后的ALP，2-8℃保存备用；

3）、将上述活化的PR3抗体与活化的ALP混合，2-8℃条件下静置12-24h，用Supperdex200凝胶纯化柱纯化偶联物，获得PR3抗体-ALP连接物浓溶液， 2-8℃保存备用；

4）、将PR3抗体-ALP连接物浓溶液用酶标记物稀释液稀释到0.02-0.1μg/mL，完成酶标记试剂的制备。

4.如权利要求1-3任其一所述的试剂盒，其特征在于，所述校准品的制备步骤如下：

一、校准品稀释液的配制：

1）、量取600mL纯化水于容器中，称取200mL新生牛血清加入容器中，充分搅拌混合均匀； 

2）、称取磷酸氢二钾3.4g、磷酸二氢钾0.36g、Proclin300 0.02 mL加入容器中，充分搅拌至完全溶解； 

3）、调pH，控制pH在7.0-7.5之间； 

4）、最后用纯化水定容至1L，2-8℃保存待用；

二、校准品的配制：用校准品稀释液将PR3抗体分别配制为0、5、20、50、150、300U/mL共6个浓度点。

5.如权利要求1-4任其一所述的试剂盒，其特征在于，所述清洗浓缩液的配置步骤如下：以配制1L为例： 

1）、量取800mL纯化水于容器中，称取Tris 12.1g和NaCl 8.5g于容器中，充分搅拌至完全溶解；

2）、称取Tween-20 5g 、Triton X-100 5g，充分搅拌，直至完全混匀；

3）、调pH，控制pH在7.5-8.0之间； 

4）、最后定容1000mL，2-8℃保存。