[发明专利]一种基于柱后衍生的低分子量肝素完全降解产物检测方法

权利要求书

1.一种基于柱后衍生的低分子量肝素完全降解产物检测方法，其特征在于，步骤为：将低分子量肝素降解得到完全酶解产物；将所述完全酶解产物经过离子对反相色谱进行分离，再进行柱后荧光衍生反应，最后进行荧光检测，分析完全酶解产物组成。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述降解过程为用肝素酶I、II和III在20～30℃下降解46～50 h，降解产物经超滤膜过滤后真空减压干燥得到完全酶解产物。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述离子对反相色谱法的过程为在流速为1～5mL/min下用第一流动相和第二流动相洗脱，在流速为0.1～0.8mL/min下用第三流动相和第四流动相进行柱后荧光衍生反应。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述第一流动相的配制过程为将烷基铵类试剂和氯化钠溶于乙腈或甲醇中得到烷基铵类试剂浓度为2～10mM、氯化钠浓度为0.1～0.5M的第一流动相，所述第一流动相的pH值为5.0～6.5。

5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述第二流动相的配制过程为将烷基铵类试剂和氯化钠溶于乙腈或甲醇中得到烷基铵类试剂浓度为2～10mM、氯化钠浓度为0.4～1.5M的第一流动相，所述第二流动相的pH值为5.0～6.5。

6.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述第三流动相的配制过程为将2-氰基乙酰胺溶解于去离子水中，得到2-氰基乙酰胺质量百分比为1%～5%的第三流动相。

7.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述第四流动相的配制过程为将氢氧化钠溶解于去离子水中，得到氢氧化钠浓度为0.2～1.0M的第四流动相。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述荧光检测的条件为激发波长为346nm，发射波长为410nm。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述分析过程是以8种肝素二糖标准品为对照，对低分子量肝素标准品完全酶解产物和样品完全酶解产物的色谱峰进行归属，以低分子量肝素标准品为参照，比较标准品和样品之间的异同点，分析样品完全酶解产物组成，其中8种二糖标准品分别为ΔUA-GlcNAc、ΔUA-GlcNS、ΔUA-GlcNAc6S、ΔUA2S-GlcNAc、ΔUA-GlcNS6S、ΔUA2S-GlcNS、ΔUA2S-GlcNAc6S、ΔUA2S-GlcNS6S。