[发明专利]复制缺陷型沙粒病毒载体

权利要求书

1.沙粒病毒基因组在制备免疫原性组合物中的用途，其中所述基因组中编码糖蛋白(GP)的沙粒病毒开放阅读框被除去或在功能上失活，其中所述基因组中编码核蛋白(NP)、基质蛋白Z和RNA依赖性RNA聚合酶L的沙粒病毒开放阅读框是完好的，其中所述沙粒病毒基因组包含编码来自感染性生物、肿瘤或变应原的抗原的外源核糖核酸序列，并且其中包含所述基因组的沙粒病毒颗粒(i)是感染性的，(ii)不能在非回补细胞中进一步产生感染性后代颗粒，和(iii)具有在被所述沙粒病毒颗粒感染的细胞中扩增和表达其遗传信息的能力，

其中所述沙粒病毒是淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述抗原选自：呼吸道合胞体病毒抗原、人免疫缺陷病毒抗原、乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎病毒抗原、带状疱疹病毒抗原、单纯疱疹病毒抗原、巨细胞病毒抗原、结核分枝杆菌抗原、嗜血杆菌抗原、肺炎双球菌抗原、疟原虫抗原、阿米巴虫抗原、丝虫(filaria)抗原、朊病毒抗原、和适用于诱导或调节针对肿瘤疾病之免疫应答的抗原。

3.根据权利要求2所述的用途，其中所述肿瘤疾病选自黑色素瘤、前列腺癌、乳腺癌、肺癌和神经母细胞瘤。

4.根据权利要求2所述的用途，其中适用于诱导或调节针对肿瘤疾病之免疫应答的抗原选自HER2/neu、GD2、EGF-R、CEA、CD52、MUC1、gp100蛋白、MELAN-A/MART1以及肿瘤抑制基因WT1的产物。

5.根据权利要求1所述的用途，其中所述抗原为HIV gp41、gp120、gag或pol，丙型肝炎病毒的非结构(NS)蛋白，流感病毒血球凝集素或神经氨酸酶，或者疟疾的环子孢子蛋白。

6.根据权利要求1所述的用途，其中所述编码糖蛋白(GP)的沙粒病毒开放阅读框被除去，并且替换成所述外源核糖核酸序列，并且其中所述抗原来自肿瘤。

7.根据权利要求1所述的用途，其中所述编码糖蛋白(GP)的沙粒病毒开放阅读框被除去，并且替换成所述外源核糖核酸序列，并且其中所述抗原来自感染性生物。

8.根据权利要求1至7任一项所述的用途，其中所述外源核糖核酸序列处于下列的控制之下：沙粒病毒S节段或L节段的5’UTR或3’UTR内的一个或更多个沙粒病毒启动子，其中所述外源核糖核酸序列自身进行表达或者通过与沙粒病毒蛋白质开放阅读框融合而被通读的形式表达。

9.根据权利要求1至7任一项所述的用途，其中所述外源核糖核酸序列处于下列的控制之下：可被病毒RNA依赖性RNA聚合酶、细胞RNA聚合酶I、RNA聚合酶II或RNA聚合酶III所读出的调控元件，其中所述外源核糖核酸序列自身进行表达或者通过与沙粒病毒蛋白质开放阅读框融合而被通读的形式表达。

10.根据权利要求1至7任一项所述的用途，其中所述沙粒病毒基因组包含一个或更多个内部核糖体进入位点，来增强所述外源核糖核酸序列所编码的所述抗原、目的蛋白质或肽在被沙粒病毒载体感染的细胞中的表达。

11.包含如权利要求1至10中任一项中所限定的沙粒病毒基因组的载体在制备免疫原性组合物中的用途。

12.回补细胞在用于产生包含沙粒病毒颗粒的免疫原性组合物中的用途，其中所述回补细胞被改造成

(i)包含如权利要求1至10中任一项中所限定的沙粒病毒基因组，和

(ii)表达已从所述沙粒病毒基因组中被除去或者在功能上失活的沙粒病毒GP开放阅读框。

13.根据权利要求12所述的用途，其中所述产生还包括：

(a)对如权利要求12中所限定的回补细胞进行培养；以及

(b)收获包含所述沙粒病毒颗粒的培养物上清。