[发明专利]复制缺陷型沙粒病毒载体

说明书

本发明涉及复制缺陷型沙粒病毒载体。本发明涉及一种感染性沙粒病毒颗粒，其被改造成包含能在被感染细胞中扩增和表达其遗传信息但不能在正常的非基因工程细胞中进一步产生感染性后代颗粒的基因组。沙粒病毒的四个开放阅读框即糖蛋白(GP)、核蛋白(NP)、基质蛋白Z和RNA依赖性RNA聚合酶中的一个或更多个被除去或突变，以阻止在正常细胞中进行复制，但是仍然可允许在被沙粒病毒载体感染的细胞中进行基因表达，编码抗原或其他目的蛋白质的外源基因或或者调节宿主基因表达的核酸在沙粒病毒启动子、内部核糖体进入位点的控制下进行表达，或者在可被病毒RNA依赖性RNA聚合酶、细胞RNA聚合酶I、RNA聚合酶II或RNA聚合酶III读出的调控元件的控制下进行表达。

本申请是中国专利申请200880123157.6的分案，后者是2008年12月22日提交的PCT申请PCT/EP2008/010994于2010年6月28日进入中国国家阶段的申请。

技术领域

本发明涉及适合用作疫苗或基因治疗之载体的经基因修饰沙粒病毒(arenavirus)以及利用这些病毒进行疫苗接种和疾病治疗的方法。

背景技术

预防性疫苗代表了现代医学最成功的篇章之一，其使天花在世界上消失，并且控制了脊髓灰质炎、麻疹和许多其他破坏性感染性疾病。最近，出现了预防癌症的疫苗，人们正在努力开发治疗形式的“疫苗”，希望其可用于感染和恶性肿瘤。历史上，疫苗接种策略包括多种方法：从最开始利用野生型传染源和自(再)接种肿瘤细胞，然后用减毒活传染剂和死肿瘤组织，随着时间的推移，临床医学越来越倾向于使用分别来自传染源或肿瘤的(惰性)蛋白质和/或其它提取物(一般称为“抗原”)。这个逐渐的过程代表了寻找更安全的疫苗制剂的过程，然而，这常常伴随着疫苗效力的相对损失。近年来，生物工程技术的发展使得另一种方法成为可能，所述方法目前被广泛认为是最具有前景的方法之一：给用作“船渡”(称为“载体”)的传染源装备来自所选病原体或肿瘤的抗原。由此，在所述载体赋予的强免疫增强(“免疫原性”)情形下，疫苗接种者的免疫应答识别目的抗原。

这种“载体方法”已经可在组织培养物水平下将外源基因直接引入活细胞中，也可在多细胞生物(包括人)中将外源基因直接引入活细胞中，因此，载体还可用于在培养细胞中或在基因治疗中表达基因。

目前有很多载体用于实验研究中，包括疫苗接种和基因治疗，最终目的是优化针对临床应用(疫苗和基因治疗)或生物技术(细胞培养物中的基因转移)的效力和安全性。

一般认为，载体常具有其来源生物(例如病毒)的一般性状。因此，开发用于载体设计的新病毒家族提供了发现新的性状组合的前景，所述性状组合可赋予这种新型载体以空前的能力以及在生物医学应用中的相应应用。然而，载体设计需要将所用生物的安全性考虑在内，所以必须提出如何以不干扰期望的性状(比如作为疫苗施用的免疫原性)的方式消除所述生物的致病潜能的策略。

70多年以来，已知一般的沙粒病毒(特别是淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV))能引发特别强和持久的体液和细胞介导的免疫应答。值得注意的是，尽管如此，针对病毒包膜糖蛋白(GP)的保护性中和抗体免疫性极低，感染导致的针对再感染的抗体介导保护作用极低(如果有的话)。而且，几十年来已经稳固地确定，由于其非细胞溶解性(不破坏细胞的特性)，沙粒病毒可在某些条件下于动物中维持长期的抗原表达而不引起疾病。最近，已经描述了用于操作感染性沙粒病毒基因组的反向遗传系统(L.Flatz，A.Bergthaler，J.C.de laTorre，and D.D.Pinschewer，Proc Natl Acad Sci USA103：4663-4668.2006；A.B.Sanchezand J.C.de la Tore，Virology350：370，2006)，但是，到目前为止，沙粒病毒还未被用作疫苗载体。这主要是因为两个主要障碍：i)沙粒病毒可引发极严重的感染，这可随后导致严重的疾病和免疫抑制。ii)还不能引入选定的外源抗原。

发明内容