[发明专利]一种茜草配方颗粒高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱

权利要求书

1.一种茜草配方颗粒高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）供试品溶液的制备：取茜草配方颗粒置于具塞锥形瓶中，加入蒸馏水溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得茜草配方颗粒水溶液；移取茜草配方颗粒水溶液至分液漏斗中，加乙酸乙酯振摇提取后，合并乙酸乙酯液，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至量瓶中，加甲醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得茜草配方颗粒脂溶性成分溶液；

（2）高效液相色谱分析：将供试品溶液注入高效液相色谱分析仪进行高效液相色谱测定，得到指纹图谱，色谱分析条件为：色谱柱为绿百草Ecosil 120-5-C18 AQ Plus，4.6mm×250mm，5μm；检测波长250nm；流动相为甲醇-0.05%磷酸水，梯度洗脱，流速为0.9-1.1mL/min；其中，梯度洗脱具体程序如下：

a、茜草配方颗粒水溶液的梯度洗脱程序为：

0~20 min：甲醇浓度由5%匀速增加至30%，

20~25 min：甲醇浓度由30%匀速增加至50%，

25~40 min：甲醇浓度由50%匀速增加至70%，

40~60 min：甲醇浓度由70%匀速增加至100%，

60~70 min：甲醇浓度保持在100%；

b、茜草配方颗粒脂溶性成分溶液的梯度洗脱程序为：

0~10 min：甲醇浓度由5%匀速增加至50%，

10~60 min：甲醇浓度由50%匀速增加至100%，

60~70 min：甲醇浓度保持在100%。

2.根据权利要求1所述的茜草配方颗粒高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于：采用如下步骤：

（1）供试品溶液的制备：取茜草配方颗粒0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入蒸馏水20mL，溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得茜草配方颗粒水溶液；精密移取茜草配方颗粒水溶液10ml，移入分液漏斗中，加乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得茜草配方颗粒脂溶性成分溶液；

（2）高效液相色谱分析：将供试品溶液注入高效液相色谱分析仪进行高效液相色谱测定，得到指纹图谱，色谱分析条件为：色谱柱为绿百草Ecosil 120-5-C18 AQ Plus，4.6mm×250mm，5μm；检测波长250nm；流动相为甲醇-0.05%磷酸水，梯度洗脱，流速为1mL/min；其中，梯度洗脱具体程序如下：

a、茜草配方颗粒水溶液的梯度洗脱程序为：

0~20 min：甲醇浓度由5%匀速增加至30%，

20~25 min：甲醇浓度由30%匀速增加至50%，

25~40 min：甲醇浓度由50%匀速增加至70%，

40~60 min：甲醇浓度由70%匀速增加至100%，

60~70 min：甲醇浓度保持在100%；

b、茜草配方颗粒脂溶性成分溶液的梯度洗脱程序为：

0~10 min：甲醇浓度由5%匀速增加至50%，

10~60 min：甲醇浓度由50%匀速增加至100%，

60~70 min：甲醇浓度保持在100%。

3.根据权利要求2所述的茜草配方颗粒高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于：所得到的茜草配方颗粒水溶液HPLC标准指纹图谱共有色谱峰11个，其保留时间分别为1号峰6.072 min、2号峰6.559 min、3号峰8.087 min、4号峰9.170 min、5号峰12.118 min、6号峰20.988 min、7号峰29.251 min、8号峰32.211 min、9号峰33.189 min、10号峰38.430 min、11号峰45.431 min；所得到的茜草配方颗粒脂溶性成分HPLC标准指纹图谱共有色谱峰共有9个，其保留时间分别为1号峰12.156min、2号峰12.832min、3号峰14.552min、4号峰22.615min、5号峰23.291min、6号峰25.412min、7号峰27.356min、8号峰34.383min、9号峰37.076min。