[发明专利]一种茜草配方颗粒高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药配方颗粒指纹图谱的建立方法，特别是茜草配方颗粒高效液相色谱指纹图谱的建立方法，以及由此方法所得到的茜草配方颗粒标准指纹图谱，属于药物分析技术领域中。

背景技术

茜草配方颗粒是通过对中药茜草进行提取、浓缩、制粒所得。茜草为茜草科植物茜草Rubia cordifolia L. 的干燥根和根茎，主产于安徽、江苏、山东、河南、陕西。春、秋二季采挖，除去泥沙，干燥。茜草性味苦寒，归肝经，用于凉血、祛瘀、止血、通经，主治吐血、衄血、崩漏、外伤出血、瘀阻经闭、关节痹痛、跌扑肿痛。临床包括茜草和茜草炭的使用。

《中国药典》2010年版对茜草的质量控制包括原植物品种、药材性状、理化鉴别、含量测定等项目，文献也对茜草中化学成分进行阐述，包括茜草素、羟基茜草素等蒽醌及其苷类，大叶茜草素，茜草内酯等萘醌及其苷类，环己肽类，三萜类，多糖等成分，但是对于茜草配方颗粒这样有效成分类型多、组分复杂的中药制剂，仅测定某类成分的含量，难以客观、有效地评价或控制药材的质量。

中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。色谱指纹图谱技术作为一种多组分复杂样品的有效质量控制方法，能够反映出待测样品的整体性、特征性，目前已被广泛用于中草药及其各种制剂的质量控制。目前，中药指纹图谱技术已涉及众多方法，由于高效液相色谱（HPLC）具有分离效能高、选择性高、检测灵敏度高、分析速度快、应用范围广等特点，且中药成分绝大多数可在高效液相色谱仪上进行分析检测，因此高效液相色谱法已成为中药指纹图谱技术的首选方法。但目前还未见有利用高效液相色谱（HPLC）方法对茜草配方颗粒指纹图谱进行测试和分析的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种茜草配方颗粒高效液相色谱指纹图谱的建立方法，以及由此方法所得到的茜草配方颗粒标准指纹图谱，该方法及图谱可提供一种能有效控制茜草配方颗粒质量的方法，为茜草配方颗粒的质量控制提供参考。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：一种茜草配方颗粒高效液相色谱指纹图谱的建立方法，包括如下步骤：

（1）供试品溶液的制备：取茜草配方颗粒置于具塞锥形瓶中，加入蒸馏水溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得茜草配方颗粒水溶液；移取茜草配方颗粒水溶液至分液漏斗中，加乙酸乙酯振摇提取后，合并乙酸乙酯液，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至量瓶中，加甲醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得茜草配方颗粒脂溶性成分溶液；

（2）高效液相色谱分析：将供试品溶液注入高效液相色谱分析仪进行高效液相色谱测定，得到指纹图谱，色谱分析条件为：色谱柱为绿百草Ecosil 120-5-C18 AQ Plus，4.6mm×250mm，5μm；检测波长250nm；流动相为甲醇-0.05%磷酸水，梯度洗脱，流速为0.9-1.1mL/min；其中，梯度洗脱具体程序如下：

a、茜草配方颗粒水溶液的梯度洗脱程序为：

0~20 min：甲醇浓度由5%匀速增加至30%，

20~25 min：甲醇浓度由30%匀速增加至50%，

25~40 min：甲醇浓度由50%匀速增加至70%，

40~60 min：甲醇浓度由70%匀速增加至100%，

60~70 min：甲醇浓度保持在100%；

b、茜草配方颗粒脂溶性成分溶液的梯度洗脱程序为：

0~10 min：甲醇浓度由5%匀速增加至50%，

10~60 min：甲醇浓度由50%匀速增加至100%，

60~70 min：甲醇浓度保持在100%。

本发明最优的技术方案为采用如下步骤：

（1）供试品溶液的制备：取茜草配方颗粒0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入蒸馏水20mL，溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得茜草配方颗粒水溶液；精密移取茜草配方颗粒水溶液10ml，移入分液漏斗中，加乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得茜草配方颗粒脂溶性成分溶液；