[发明专利]一种含海藻糖的牛胚胎体外培养液及培养方法

权利要求书

1.一种含海藻糖的牛胚胎体外培养液，其特征在于所述牛胚胎体外培养液组成如下：海藻糖0.1～1.0mg/mL，大豆甙元0.1～10μg/mL，青霉素100IU/mL，链霉素100μg/mL，血清白蛋白5～10mg/mL，溶剂为SOF培养液。

2.如权利要求1所述的牛胚胎体外培养液，其特征在于所述培养液组成如下：

溶剂为SOF培养液。

3.利用权利要求1所述牛胚胎体外培养液进行牛胚胎体外培养的方法，所述方法包括：将受精后的早期牛胚胎用SOF培养液反复冲洗后，放入所述含海藻糖的牛胚胎体外培养液中，于38～39℃、5%CO₂的环境内，进行胚胎体外培养。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述早期牛胚胎由牛卵母细胞经体外成熟培养、体外受精获得。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述方法如下：

（1）配制牛卵母细胞体外成熟培养液，组成如下：海藻糖0.1～1.0mg/mL，大豆甙元0.1～10μg/mL，青霉素100IU/mL，链霉素100μg/mL，血清体积百分含量8%～20%，溶剂为M199培养液；

（2）将牛卵母细胞体外成熟培养液在一次性塑料培养皿上形成体积为50～100μL的培养小滴，置38～39℃环境中预热1～3小时，牛卵母细胞经冲洗后放入预热后的培养小滴，在38～39℃、5%CO₂的环境内培养20～24小时；

（3）用受精培养液在一次性塑料培养皿上形成体积为50～100μL的受精小滴，置38～39℃环境中预热1～3小时，将储存在液氮罐中的冻精解冻，然后与步骤（2）培养后的牛卵母细胞一同放入受精小滴，在38～39℃、5%CO₂的环境内培养15～18小时，进行受精，得到受精后的早期胚胎；

（4）配制牛胚胎体外培养液，组成如下：海藻糖0.1～1.0mg/mL，大豆甙元0.1～10μg/mL，青霉素100IU/mL，链霉素100μg/mL，血清白蛋白5～10mg/mL，溶剂为SOF培养液；

（5）用步骤（4）牛胚胎体外培养液在一次性塑料培养皿上形成体积为50～100μL的培养小滴，置38～39℃环境中预热1～3小时，将受精后的早期胚胎冲洗后，放入培养小滴中，在38～39℃、5%CO₂的环境内培养。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于步骤（3）所述受精培养液为含5～10mg/mL肝素的BO液、或者Tyrode’s改良液。