[发明专利]一种检测多种蚊媒病原体的试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物芯片和诊断试剂技术领域，具体涉及一种检测多种蚊媒病原体的试剂盒及检测方法，其针对多种蚊媒传染病病原体设计特异性核酸探针并与多重聚合酶链反应（PCR）技术结合、采用液相芯片同步快速检测多种蚊媒病原体及其分型。

背景技术

蚊媒传染病是指有蚊虫叮咬人体而传播的疾病，近年来呈逐年上升趋势。蚊媒传染病一旦发生流行或暴发，将给社会稳定、人民群众的健康、生活、生产带来极大影响。根据国境口岸传染病排查需要，将黄热病、登革热、流行性乙型脑炎（日本脑炎）、疟疾、西尼罗热及基孔肯雅热六种疾病作为口岸重点关注的蚊媒传染病。这六种疾病在非洲等国家广泛流行、极易造成国际间的流行和传播，而这些疾病均有发热等症状，没有实验室的检测结果很难确诊。

在对上述病原体检测方面，目前常规的检测手段包括分离培养方法、免疫学方法，以及核酸检测方法，如PCR、多重PCR、RT-PCR和基于Taqman探针技术的实时荧光PCR方法等。但这些方法或多或少存在一些缺陷：如分离培养方法在技术上比较困难，且获得病原学诊断和药敏结果常需要3～5天以上，在临床上难以及早进行病原学诊断和耐药性测定，无法满足临床救治危重感染者的需要；免疫学方法检测病毒的特异性抗体时，不仅需分别在患者感染的急性期及恢复期采集双份血清，并且还可能存在抗原抗体间的交叉反应而干扰检测，不利于疾病的早期诊断；在核酸检测方法方面，PCR、多重PCR、RT-PCR方法及基于Taqman探针技术的实时荧光PCR方法等的灵敏度高，特异性好，适合于快速检测鉴定，但这些方法大多基于单一反应或较少数重数的多重反应的检测，在对临床样本进行检测时，对每一个样本的数十种指标进行检测和排除时，需要耗费大量的劳动和成本。

对于分子实验室中大量样本的常规检测，研究者正致力于开发和建设以多重快速检测为目标的检测平台，典型的高通量多重分析技术包括生物芯片、毛细电泳和质谱等，由于其能在同一反应容器中同时检测多个核酸序列，因此在节约时间、劳动和成本方面更具有优势，是高通量、特异、可靠、快速和经济的核酸检测方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种检测多种蚊媒病原体的试剂盒及检测方法，其利用多重聚合酶链反应（PCR）结合液相芯片来检测多重蚊媒传染病病原体，可以平行一次检测12种病原体或亚型，操作便捷，特异性强，灵敏度高，稳定性好。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：

一种检测多种蚊媒病原体的试剂盒，该试剂盒包括用于检测下列病原体的探针：黄热病毒的探针YFV-PF、基孔肯雅病毒的探针CHIKV-PF、西尼罗WNV-PF、乙型脑炎病毒的探针JEV-PF、登革I型病毒的探针DV1-PF、登革Ⅱ型病毒的探针DV2-PF、登革Ⅲ型病毒的探针DV3-PF、登革Ⅳ型病毒的探针DV4-PF、间日疟原虫的探针PV-PF、三日疟原虫的探针PM-PF、卵形疟原虫的探针PO-PF和恶性疟原虫的探针PF-PF，上述探针的核苷酸序列分别参见表1，SEQ ID No：1-12。

表1 用于检测病原体的探针序列