[发明专利]松果菊‘王冠’的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物的组织培养方法，尤其涉及一种松果菊‘王冠’的组织培养方法，属于农业种植技术领域。

背景技术

    松果菊‘王冠’为欧洲松果菊品种，国内几乎没有种植培养，它是一种不寻常的紫红色松果菊，首轮花开放基本都是以单瓣的形式，之后开放的花朵会开始呈现双层花朵的效果。松果菊植株强健，花期长，属于蜜源植物，可以吸引蜜蜂和蝴蝶。 因此，作为国外引种品种，松果菊‘王冠’在园林上具有很高的应用推广价值。植物的组织培养是根据植物细胞具有“全能性”的理论，于近年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞、原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。狭义则是指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。植物的组织培养具有：（1）占用空间小、不受地区、季节限制；（2）培养周期短、可短时间大量繁殖；（3）不存在变异、可保持原母本的一切遗传特征；（4）培养脱毒作物；（5）投资少，经济效益高等众多优点，正逐渐成为多种植物培育的新方式。但目前尚未有关于松果菊‘王冠’的组织培养方法的相关研究。

发明内容

本发明的目的是为了解决松果菊‘王冠’在我国尚未有有推广种植应用的问题，提供了一种提高松果菊‘王冠’快速繁殖和促进生长、提高成活率的一种组织培养方法。

本发明采用如下的技术方案：一种松果菊‘王冠’的组织培养方法，包括以下步骤：

（1）无菌材料的获得

选取饱满的种子为材料，在超净工作台上用75%的酒精消毒10~40s，然后用无菌水冲洗3~5遍，再用次氯酸钠溶液消毒10~30分钟，然后用无菌水冲洗4~6遍，用无菌滤纸吸干多余水分后接种到MS培养基中，28~30天后待种子长出无菌苗；

（2）不定芽的诱导

将步骤（1）中获得的无菌苗作为材料，切下2-4cm的叶柄作为外植体，接种到诱导培养基上，调节pH至5.6~5.8，培养28~30天时间，培养温度为23~26℃，光照强度为1500~2000Lux，光照时间为10~12h；

（3）生根培养

将步骤（2）中诱导的高度2~5cm的丛生苗切成单株接种到生根培养基上，调节pH至5.6~5.8，培养18~20天后，基部长出3~24条主根，主根长度均值达到4.5cm；

（4）炼苗与移栽

将高度在2~5cm，叶片数在2~6片、根系长度在3~6cm的组培苗进行炼苗，打开瓶盖2~3天，使其适应外界环境，2~3天后洗掉根部的培养基，用700~900倍的多菌灵浸泡1~10分钟，移栽至大棚内，覆膜保湿且遮光。

2、如权利要求1所述的松果菊‘王冠’的组织培养方法，其特征在于：所述步骤（2）中的诱导培养基为MS+0.1~1.0 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0.1~1.0mg/L 萘乙酸+30~32 g/L蔗糖+6.8~7.0g/L琼脂粉。

3、如权利要求1所述的松果菊‘王冠’的组织培养方法，其特征在于：所述步骤（3）中的生根培养基为1/2MS+0.1~1.0 mg/L 吲哚丁酸+30~32 g/L蔗糖+6.8~7.0g/L琼脂粉。

本发明通过组培技术，利用植物组织培养手段对松果菊‘王冠’繁殖，具有繁殖快速、生长速度快、节省时间，植物成活率高，适应能力强，适于松果菊‘王冠’在短期内的推广种植。

具体实施方式

下面将结合具体实施方式对本发明作进一步说明。

实施例1

（1）无菌材料的获得：

选取饱满的种子为材料，在超净工作台上用75%的酒精消毒10s，然后用无菌水冲洗3遍，再用次氯酸钠溶液消毒10分钟，然后用无菌水冲洗4遍，用无菌滤纸吸干多余水分后接种到MS培养基中，30天后待种子长出无菌苗。

（2）不定芽的诱导：

将步骤（1）中获得的无菌苗作为材料，切下长为2cm的叶柄作为外植体，接种到诱导培养基上，诱导培养基为MS+0.1mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0.1mg/L 萘乙酸+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，调节pH至5.8，培养30天时间，培养条件温度在23℃，光照强度为1500Lux，光照时间12h。

（3）生根培养