[发明专利]一种用于弓形虫感染预防的疫苗和制备方法及其应用

权利要求书

1.一种用于弓形虫感染预防的核苷酸序列，其含有选自以下的核苷酸序列：

1）序列表中SEQ ID No.1中所示的核苷酸序列；

2）与1）中所示的核苷酸序列互补的核苷酸序列；

3）对上述1）或2）所示核苷酸序列进行一个或多个碱基的取代、缺失、添加修饰，并具有弓形虫感染预防功能的核苷酸序列。

2.一种重组蛋白，其氨基酸序列由权利要求1所述的核苷酸序列编码。

3.根据权利要求2所述的重组蛋白，其特征在于：所述重组蛋白的氨基酸序列参见序列表中SEQ ID No.2。

4.一种重组载体，其包括权利要求1所述的核苷酸序列。

5.一种重组质粒，其核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。

6.一种疫苗，其包括权利要求1所述的核苷酸序列，以及医学上可接受的载体。

7.权利要求1所述的核苷酸序列、权利要求2或3所述的重组蛋白、权利要求4所述的重组载体、权利要求5所述的重组质粒、权利要求6所述的疫苗在弓形虫感染预防中的应用。

8.一种权利要求6所述的疫苗的制备方法，步骤如下：

（1）提取弓形虫RH株总RNA；

（2）RT-PCR扩增RH株总RNA；

（3）将步骤2中的扩增产物与载体连接；

（4）pVAX I质粒的小量提取；

（5）回收pVAX I载体及目的片段HSP60；

（6） 连接pVAX I载体与目的片段HSP60；

（7）将连接产物转化至宿主菌中。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：所述RT-PCR扩增RH株总RNA时所用引物为：

上游引物：5′-GGTACCATGCTTGCCCGCGCTTCAGC -3′；

下游引物：5′-AAGGAAAAAAGCGGCCGCCTAGTACATGCCTCCCATGCCGC-3′。

10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：所述RT-PCR扩增RH株总RNA时PCR反应条件为：94℃预变性2min，94℃变性1min，60.4℃复性45s；72℃延伸 2min；35个循环，最后，72℃延伸10min。